十二烷（基）硫酸鈉－聚丙烯醯胺凝膠電泳SDS polyacrylamide gel electrophoresis
基本介紹
- 中文名：十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳
- 外文名：SDS polyacrylamide gel electrophoresis
- 屬於：聚丙烯醯胺凝膠電泳
- 套用用途：用於污泥脫水
簡介,PAM沉澱的技術流程,十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳,
簡介
在陰離子表面活性劑十二烷（基）硫酸鈉（SDS）存在下進行的一種聚丙烯醯胺凝膠電泳。由2－巰基乙醇等將S－S鍵切斷的蛋白質，在SDS溶液中，大多是1克約與1.4克的SDS結合，形成電荷密度大致一定的複合體。所以在凝膠中電泳的速度是由蛋白質的分子量決定的。所以用分子量已知的標準蛋白質，則可以迅速而準確地測出蛋白質的分子量，這已被廣泛套用。對含有亞單位的蛋白質來說，可測得各亞單位的分子量。值得注意的是，有的糖蛋白或膜蛋白等有時呈異常值的現象。測定的材料不一定要求很純，因分離效果好，所以也常用於對蛋白質混合物之分離。與等電點電泳配合，進行雙向電泳（O′Farrell法），可分離和測定多種蛋白質。
PAM沉澱的技術流程
PAM沉澱的技術流程
沉澱是發生化學反應時生成了不溶於反應物所在溶液的物質。從字意上理解就是在重力作用下沉澱去除。污水中的懸浮物質，可以這是一種物理過程，簡便易行，效果良好，是污水處理的重要技術之一。
根據懸浮物質的性質、濃度及聚丙烯醯胺絮凝性能，沉澱可以分為：自然沉澱，絮凝沉澱，區域沉澱。域沉澱的懸浮顆泣濃度較高(5000mg/L以上)，顆粒的沉降受到周圍其它顆粒影響，顆粒間相對位置保持不變，形成一個整體共同下沉，與澄清水之間有清晰的泥水界面。二次沉澱池與污泥濃縮池中均有區域沉澱發生。
廢水中懸浮固體濃度不高，而且不具有凝聚的性能，在沉澱過程中，固體顆粒不改變形狀，也不互相粘合，各自獨立地完成沉澱過程。（沉砂池和初沉池的初期沉澱）壓縮沉澱發生在高濃度懸浮顆粒的沉降過程中，由於懸浮顆粒濃度很高，顆粒相互之間已擠集成團塊結構，互相接觸，互相支承，下層顆粒間的水在上層顆粒的重力作用下被擠出，使污泥得到濃縮。二沉池污泥斗中的聚丙烯醯胺濃縮過程以及在濃縮池中污泥的濃縮過程存在壓縮沉澱。自由沉澱發生在水中懸浮固體濃度不高，沉澱過程懸浮固體之間互不干擾，顆粒各自單獨進行沉澱，顆粒的沉澱軌跡呈直線。整個沉澱過程中，顆粒的物理性質，如形狀，大小及比重等不發生變化。這種顆粒在沉砂池中的沉澱是自由沉澱。
廢水中懸浮固體濃度不高，而且不具有凝聚的性能，在沉澱過程中，固體顆粒不改變形狀，也不互相粘合，各自獨立地完成沉澱過程。（沉砂池和初沉池的初期沉澱）壓縮沉澱發生在高濃度懸浮顆粒的沉降過程中，由於懸浮顆粒濃度很高，顆粒相互之間已擠集成團塊結構，互相接觸，互相支承，下層顆粒間的水在上層顆粒的重力作用下被擠出，使污泥得到濃縮。二沉池污泥斗中的濃縮過程以及在濃縮池中污泥的濃縮過程存在壓縮聚丙烯醯胺沉澱。
絮凝沉澱是顆粒物在水中作絮凝沉澱的過程。在水中投加混凝劑後，其中懸浮物的膠體及分散顆粒在分子力的相互作用下生成絮狀體且在沉降過程中它們互相碰撞凝聚，其尺寸和質量不斷變大，沉速不斷增加。懸浮物的去除率不但取決於沉澱速度，而且與沉澱深度有關。地面水中投加混凝劑後形成的礬花，生活污水中的有機懸浮物，活性污泥在沉澱過程中都會出現絮凝沉澱的現象。
套用用途
1)用於污泥脫水根據污泥性質可選用本產品的相應型號，可有效在污泥進入壓濾之前進行污泥脫水，脫水時，產生絮團大，不粘濾布，壓濾時不散，流泥餅較厚，脫水效率高，泥餅含水率在80%以下。
2)用於生活污水和有機廢水的處理，本產品在配性或鹼性介質中均呈現陽電性，這樣對污水中懸浮顆粒帶陰電荷的污水進行絮凝沉澱，澄清很有效。如生產糧食酒精廢水，造紙廢水，城市污水處理廠的廢水，啤酒廢水，味素廠廢水，製糖廢水，有機含量高 廢水、飼料廢水，紡織印染廢水等，用陽離子聚丙烯醯胺要比用陰離子、非離子聚丙烯醯胺或無機鹽類效果要高數倍或數十倍，因為這類廢水普遍帶陰電荷。
3)用於以江河水作水源的自來水的處理絮凝劑，用量少，效果好，成本低，特別是和無機絮凝劑複合使用效果更好，它將成為治長江、黃河及其它流域的自來水廠的高效絮凝劑。
5)用於油田經學助劑，如粘土防膨劑，油田酸化用稠化劑。
6)用於紡織上漿劑、漿液性能穩定、落漿少、織物斷頭率低、布面光潔。
十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳
SDS-PAGE（十二烷基磺酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳）
試劑
1、電泳緩衝液（5×Tris-Glycine Buffer）：Tris 15.1g，Glycine 94g，SDS 5.0g，用800ml水進行溶解，定容至1L，室溫保存。
2、30%丙烯醯胺：丙烯醯胺29g，N,N’-亞甲雙丙烯醯胺1g，用60ml水於37℃水浴溶解，定容至100ml，濾紙過濾，置棕色瓶室溫保存。
3、1.5mol/L Tris（pH8.8）：Tris鹼18.165g，用80ml水進行溶解，待溶液冷卻至室溫，用濃HCl調pH至8.8，定容至100ml，室溫保存。
4、1.0mol/L Tris（pH6.8）：Tris鹼12.11g，用80ml水進行溶解，待溶液冷卻至室溫，用濃HCl調pH至6.8，定容至100ml，室溫保存。
5、10%SDS（pH7.2）：SDS 100g，用900ml水進行溶解（加熱至68℃可助溶），用濃HCl調pH至7.2，定容至1L，室溫保存。
6、10%過硫酸銨：過硫酸銨0.1g，用1ml水進行溶解，4℃保存兩周，常現配現用。
7、5×SDS凝膠加樣緩衝液：1MTris-HCl（pH6.8）1.25ml，SDS 0.5g，BPB 25mg，甘油2.5ml，用水溶解後定容至5ml，室溫保存。
8、染色液：甲醇：水（1：1，v/v）90ml，冰乙酸10ml，考馬斯亮藍R250 0.25g，濾紙過濾。
9、脫色液：即不加染料的染色液。
SDS-PAGE的有效分離範圍
丙烯醯胺濃度（%） | 線性分離範圍（kD） |
15 | 12~43 |
10 | 16~68 |
7.5 | 36~94 |
5.0 | 57~212 |
制膠：薄膠需分離膠約4ml、積層膠約2ml，厚膠需分離膠約6ml、積層膠約3ml。
15%分離膠 | 5ml | 10ml | 15ml |
水 | 1.1 | 2.3 | 3.4 |
30%丙烯醯胺 | 2.5 | 5.0 | 7.5 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
10%過硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 |
12%分離膠 | 5ml | 10ml | 15ml |
水 | 1.6 | 3.3 | 4.9 |
30%丙烯醯胺 | 2.0 | 4.0 | 6.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
10%過硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 |
10%分離膠 | 5ml | 10ml | 15ml |
水 | 1.9 | 4.0 | 5.9 |
30%丙烯醯胺 | 1.7 | 3.3 | 5.0 |
1.5mol/L Tris（pH8.8） | 1.3 | 2.5 | 3.8 |
10%SDS | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
10%過硫酸銨 | 0.05 | 0.1 | 0.15 |
TEMED | 0.002 | 0.004 | 0.006 |
5%積層膠 | 2ml | 3ml | 5ml |
水 | 1.4 | 2.1 | 3.4 |
30%丙烯醯胺 | 0.33 | 0.5 | 0.83 |
1.0mol/L Tris（pH6.8） | 0.25 | 0.38 | 0.63 |
10%SDS | 0.02 | 0.03 | 0.05 |
10%過硫酸銨 | 0.02 | 0.03 | 0.05 |
TEMED | 0.002 | 0.003 | 0.005 |
上樣：一般取樣10μl。
1、菌液（以大腸桿菌為例）：取1ml菌液，8000rpm離心3min收集菌體，生理鹽水洗滌2次，加蒸餾水50μl，加2×上樣液50μl，吹打混勻，沸水浴10min，瞬時離心。
2、蛋白溶液：取蛋白溶液10μl，加2×上樣液10μl，沸水浴5min，瞬時離心。
電泳：先60V電泳10～20min至樣品泳至積層膠和分離膠的分界處，然後110～120V電泳至樣品泳到凝膠末端。
染色與脫色：將凝膠浸泡在至少5倍體積染色液，沸水浴10min染色，然後將凝膠轉移至脫色液，平緩搖動4~8小時。此外，也可將凝膠直接浸泡在預冷的0.25MKCl中輕輕振搖，染色10~20min可見白色條帶。
保存凝膠：脫色後的凝膠可浸於水中，長期封裝在塑膠袋內，注意不應將凝膠保存於脫色液，否則染色的蛋白帶會褪色。
