定性聚丙烯醯胺凝膠電泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用。
基本介紹
- 中文名:定性聚丙烯醯胺凝膠電泳
- 定義:對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳
定性聚丙烯醯胺凝膠電泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形狀和電荷,它們的分離是依據其電泳遷移率的不同和凝膠的分子篩作用。
定性聚丙烯醯胺凝膠電泳是在不加入SDS 和疏基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。未加SDS的天然聚丙烯醯胺凝膠電泳可以使生物大分子在電泳過程中保持其天然的形...
聚丙烯醯胺凝膠電泳( polyacrylamide gel electrophoresis,簡稱PAGE),是以聚丙烯醯胺凝膠作為支持介質的一種常用電泳技術,用於分離蛋白質和寡核苷酸。聚丙烯醯胺凝膠由單體丙烯醯胺和甲叉雙丙烯醯胺聚合而成,聚合過程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有兩種:化學聚合法和光聚合法。化學聚合以過硫酸銨(APS)為催化...
聚丙烯醯胺凝膠電泳技術是指聚丙烯醯胺凝膠由丙烯醯胺(簡稱Acr)和交聯劑N,N'一亞甲基雙丙烯醯胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(APS),N,N,N',N' 四甲基乙二胺(TEMED)作用下,聚合交聯形成的具有網狀立體結構的凝膠,並以此為支持物進行電泳。聚丙烯醯胺凝膠電泳技術可根據不同蛋白質分子所帶電荷...
聚丙醯胺凝膠電泳屬於分子生物學,屬於中性電泳。電泳簡介 聚丙醯胺凝膠電泳 中性聚丙烯醯胺凝膠電泳 安裝電泳裝置和配製凝膠溶液 操作步驟 1.必要時可用KOH/甲醇清洗玻璃板和間隔片。2.用溫熱的去污劑溶液洗滌玻璃板和間隔片,再充分漂洗,先用自來水,再用去離子水。應拿取玻璃的邊緣部分或帶手套操作,以免手上的...
尿聚丙烯醯胺凝膠電泳實質是尿蛋白電泳,是將尿蛋白按其分子量大小、順序分為不同組分,套用十二烷基硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳的一種試驗。尿蛋白的形成主要是通過腎小球濾過、腎小管的重吸收及腎小管、尿路排泌三大機制完成。在正常生理情況下,由於腎小球孔經屏障、電荷屏障作用,尿液中蛋白質含量很少,一般定性...
聚丙烯醯胺凝膠電泳[法]聚丙烯醯胺凝膠電泳[法](polyacrylamide gel electrophoresis)是1995年經全國科學技術名詞審定委員會審定發布的醫學名詞。發布時間 1995年經全國科學技術名詞審定委員會審定發布的醫學名詞。出處 《醫學名詞 第三分冊》
十二烷(基)硫酸鈉-聚丙烯醯胺凝膠電泳SDS polyacrylamide gel electrophoresis。簡介 在陰離子表面活性劑十二烷(基)硫酸鈉(SDS)存在下進行的一種聚丙烯醯胺凝膠電泳。由2-巰基乙醇等將S-S鍵切斷的蛋白質,在SDS溶液中,大多是1克約與1.4克的SDS結合,形成電荷密度大致一定的複合體。所以在凝膠中電泳的速度是...
《聚丙烯醯胺凝膠電泳》是1975年 科學出版社出版的圖書,作者是莽克強。圖書簡介 本書介紹了聚丙烯醯胺凝膠電泳技術在分離、分析和製備蛋白質、核糖核酸等生物大分子方面的基本原理和具體操作。套用部分著重介紹了蛋白質、核糖核酸的分子量測定及該技術近年來在病毒學研究工作中的一些套用。本書可供臨床化學、食品化學、...
尿蛋白圓盤電泳又稱為SDS一聚丙烯醯胺凝膠電泳。臨床意義 區別尿蛋白的分子量,從而了解尿蛋白的形成原因和病變部位。中分子和大分子的尿蛋白主要由腎小球損傷所致;小分子量尿蛋白為腎小管及其間質病變導致,混合性蛋白尿病變累及腎小管、腎小球和間質。要求 尿蛋白定性在一個加號以上才可以測定。意義 ( l )正常...
二維聚丙烯醯胺凝膠電泳(2D―PAGE)形成的二維電泳是分離分析蛋白質最有效的一種電泳手段。原理 蛋白質的分離 通常第一維電泳是等電聚焦,在細管中(φ1~3 mm)中加入含有兩性電解質、8M的脲以及非離子型去污劑的聚丙烯醯胺凝膠進行等電聚焦,變性的蛋白質根據其等電點的不同進行分離。而後將凝膠從管中取出,用...
其它方面 電泳技術還廣泛套用於食品檢測、環境保護等方面,和人們的生活息息相關。電泳技術的廣泛使用,促使各大專院校和中等專科學校急切培養大批電泳技術人才,以滿足社會需要,所以電泳又成為不可缺少的教學科研手段。實驗室教學常用電泳技術:紙上電泳和醋酸纖維素薄膜電泳、瓊脂及瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳。
非還原性聚丙烯醯胺凝膠電泳 不含巰基乙醇或二硫蘇糖醇(DTT)等還原劑的聚丙烯醯胺凝膠電泳。在這種電泳中蛋白質的二硫鍵不會被還原打開,與還原性聚丙烯醯胺凝膠電泳的結果對比,可以分析蛋白質單體間借二硫鍵形成多聚體的情況。
非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為活性電泳是在不加入SDS 和巰基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行聚丙烯醯胺凝膠電泳,常用於酶的鑑定、同工酶分析和提純。實驗原理 非變性聚丙烯醯胺凝膠電泳(Native-PAGE)或稱為活性電泳是在不加入SDS 和巰基乙醇等變性劑的條件下,對保持活性的蛋白質進行...
二維凝膠電泳(two—dimensional gel electrophoresis,2一DE)是蛋白質組研究中最有效的分離技術。它由兩向電泳組成,第一向是以蛋白質電荷差異為基礎進行分離的等電聚焦凝膠電泳,第二向是以蛋白質分子量差異為基礎的SDS—聚丙烯醯胺凝膠電泳。雙向凝膠電泳技術最先是由O’Farrell於1975年所描述,其原理是在相互垂直的...
由一定數量的dNTP構成的特定序列,合成後經聚丙烯醯胺凝膠電泳或其他適宜方法純化,如為自製,應包括對序列準確性、純度、穩定性、功能性實驗等方面的驗證。如為外購,應提供合成機構出具的包括如上性能的質檢證明,如聚丙烯醯胺凝膠電泳法(PAGE)結果或高效液相色譜法(HPLC)分析圖譜。5.3探針 特定的帶有示蹤物(標記...
乳與乳製品中β-乳球蛋白的測定聚丙烯醯胺凝膠電泳法 《乳與乳製品中β-乳球蛋白的測定聚丙烯醯胺凝膠電泳法》是2008年8月10日實施的一項行業標準。備案信息 備案號:77276-2020 備案月報: 2020年第10號(總第246號)
第二向通過聚丙烯醯胺凝膠根據蛋白質分子量的不同進行再次分離。凝膠經染色、成像,用軟體進行對比,即可實現對蛋白質的定量研究。雙向電泳有較高的分離能力,兼容性強,適用於動物、植物、細胞、微生物等生物樣本的蛋白質組研究;如與質譜鑒結合,還可實現蛋白質的定性分析,是蛋白質組學研究的經典方法。
SDS.聚丙烯醯胺凝膠電泳 雙向電泳的第二向是將IPG膠條中經過第一向分離的蛋白轉移到第二向SDS.PAGE凝膠上,根據蛋白相對分子質量或分子量(MW)大小與第一相垂直的分離。蛋白質與十二烷基硫酸鈉(SDS)結合形成帶負電荷的蛋白質.SDS複合物,由於SDS是一種強陰離子去垢劑.所帶的負電荷遠遠超過蛋白質分子原有的電荷...
尿蛋白電泳分析 常用的方法有醋酸纖維薄膜電泳、聚丙烯醯胺凝膠電泳、尿蛋白免疫電泳等方法。該方法主要從確定尿中蛋白質的種類出發,通過區分不同尿蛋白的種類,對某些疑難病症如多發性骨髓瘤、重鏈病等有診斷和鑑別診斷的意義。同時可以區別尿蛋白的分子量大小,這對區別蛋白尿的來源,以及檢查尿中是否有特殊蛋白質具有...
第一階段為SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳,先將抗原分成不同的區帶(肉眼不可見);第二階段為轉移電泳,即將凝膠上的電泳區帶經電泳轉移至硝酸纖維素膜上;第三階段為酶免疫定位,用特異性抗體和酶標抗抗體作間接ELISA,結果陽性區帶呈顯色反應。2.免疫螢光技術(immunofluorescence techniques) 該法是以螢光素,如異硫氰酸...
利用紫外分光光譜、聚丙烯醯胺凝膠電泳法測定了APBMV粉針製劑的熱穩定性,結果顯示50℃-80℃範圍內隨著加熱時間延長,在波長280 nm處吸光度逐漸升高,聚丙烯醯胺凝膠電泳主色帶逐漸變淺,但pH值、水溶性及外觀色澤無明顯變化。根據己測定的蠍毒素的構象來看,分子結構含有二硫鍵,可能較一般的蛋白穩定。有人認為溫度和...
在克隆序列內或下游用限制性內切酶切割這些長短不一的產物,然後通過變性凝膠電泳(如變性聚丙烯醯胺凝膠電泳)將探針與模板分離開。雙鏈RF型M13 DNA也可用於單鏈DNA的製備,選用適當的引物即可製備正鏈或負鏈單鏈探針。材料:已製備好的單鏈DNA模板(方法參見第十章中有關內容)。設備:高速台式離心機,恆溫水浴鍋等。...
從樣品中純化蛋白質,其純度鑑定方法有聚丙烯醯胺凝膠電泳、電聚焦電泳和末端分析等。若兩種電泳圖譜都呈現一條區帶或恆定的末端胺基酸,就可認為此蛋白質已經純化。分子量測定 一般把分子量大於10 000的稱為蛋白質,小於10 000的稱作多肽。最大的蛋白質的分子量可上百萬。測定的方法如凝膠過濾、S D S-聚丙烯醯胺...
該方法是用細胞提取物在合成的單鏈寡核苷酸引物TTGGGG3′端上添加端粒DNA序列,用同位素標記的核苷酸dGTP標記核苷酸,6%聚丙烯醯胺凝膠電泳分離產物,進行放射自顯影。臨床套用 1.聚合酶鏈反應 可用於檢測由基因點突變、獲得啟動子、基因易位、重排、擴增等導致的癌基因的異常激活、抑癌基因的失活及檢測外源性腫瘤病毒...
T-RFLP是一種高效可重複的技術,它可以對一個生物群體的特定基因進行定性和定量測定。16SrRNA基因片段通常作為靶序列,它可通過非變性的聚丙烯醯胺凝膠電泳和毛細管電泳分離,然後用雷射誘導的螢光鑑定。此技術的優點是可以檢測微生物群落中較少的種群。另外,系統發生分類也可以通過末端片段的大小推斷出來。本技術的局限...
將離子交換層析收集的活性組分1濃縮用截留分子量為10000的透析袋對聚乙二醇濃縮,用製備型高效液相色譜分離,分別收集活性組分,並定性,得纖溶酶(活性組分2),其具蛇毒纖溶酶活性,SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳顯示為一條帶,計算的分子量與蛇毒纖溶酶標準品吻合;HPLC檢測為單一組分,保留時間與蛇毒纖溶酶標準品吻合。
由一定數量的鹼基構成的特定序列,通常採用(Deoxyribonucleicacid,DNA)合成儀人工合成,合成後經聚丙烯醯胺凝膠電泳(PAGE)或其他適宜方法純化。需提供對分子量、純度、穩定性、功能性實驗等的驗證資料。如為外購,應提供合成機構出具的合成產物的質檢證明,如PAGE電泳結果或高效液相色譜法(HPLC)分析圖譜。2.3探針 特...
可進行克隆基因的酶切圖譜分析、基因組基因的定性及定量分析、基因突變分析及限制性長度多態性分析(RELP)等。Western印跡雜交 蛋白免疫印跡雜交(Western Blot WB)是將蛋白樣本通過聚丙烯醯胺電泳按分子量大小分離,再轉移到雜交膜(blot)上,然後通過一抗/二抗複合物對靶蛋白進行特異性檢測的方法。WB是進行蛋白質...
實驗38 過氧化物同工酶聚丙烯醯胺凝膠電泳 第十三章 維生素 實驗39 維生素A的定量測定 實驗40 還原型維生素C含量的測定——2,6-二氯酚靛酚法 實驗41 維生素C含量的測定——紫外比色法 實驗42 維生素B1的定性測定 實驗43 維生素B2的螢光測定 第十四章 新陳代謝 實驗44 糖酵解中間產物的鑑定 實驗45 轉氨基反應...
1、凝膠電泳:一般可以用非變性的聚丙烯醯胺凝膠電泳可以檢測變性和天然狀態的蛋白質,或用非還原的聚丙烯醯胺電泳檢測有二硫鍵的蛋白復性後二硫鍵的配對情況。2、光譜學方法:可以用紫外差光譜、螢光光譜、圓二色性光譜(CD)等,利用兩種狀態下的光譜學特徵進行復性情況的檢測,但一般只用於復性研究中的過程檢測。3...