競爭引物PCR(COP-PCR)針對靶DNA一個側點突變設計出兩個等位特異性寡核苷酸(allele specific oligonucleotide,ASO),一個為正常引物,一個為突變引物。與AS-PCR(...
隨機引物PCR(arbitrarily primed PCR,AP-PCR)是指在對模板順序一無所知的情況下,通過隨意設計或選擇一個非特異性引物,在PCR反應體系中,首先在不嚴格條件下使引物...
實時螢光定量PCR所使用的螢光物質可分為兩種:螢光探針和螢光染料。現將其原理簡述如下:1. TaqMan螢光探針:PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的螢光探針...
等位基因特異性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物與模板之間的鹼基錯配可以有效地抑制PCR反應,進而達到模板區分(等位基因區分)的目的。...
在PCR退火時,引物和探針均可結合到靶基因模板上;在延伸階段,隨引物延伸。Taq酶沿DNA模板移動,當移動到TaqMan探針位置時,Taq酶利用其5-3外切酶活性水解切斷探針,...
兼併引物PCR (degenerate primer PCR) 是指用設計引物的方法來擴增所有已知順序核苷酸序列的PCR 法。因為密碼子具有兼併性,為了擴增一些已知編碼順序的核酸序列,可...
錨定PCR(Anchored PCR)常用於擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴,然後分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。...
存在有自然中生物的DNA複製引物(RNA引物)和聚合酶鏈式反應(PCR)中人工合成的引物(通常為DNA引物)。一般所說引物,指DNA引物,以下簡稱引物。...
形成引物二聚體及髮夾結構的能值,在錯配位點的引發效率,引物及產物的GC含量等等。必要時還需對引物進行修飾,如增加限制性內切酶位點,引進突變等。...
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。...
ASPCR的基本構思是設計2個ASO引物,使之與另一引物構成PCR反應體系。這2個引物與探針的ASO不同,等位基因特異性鹼基不是位於ASO中間,而是置於引物的3′端。這種...
在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為螢光標記)。擴增後用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板...
當退火溫度降到非特異擴增發生的水平時,特異產物會在與非特異擴增的競爭中勝出...原理就在於,溫度的升高提高了PCR擴增的特異性,但也提高了引物結合的難度,降低了...
RT -PCR即逆轉錄-聚合酶鏈反應。原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行...
touch down PCR 條件 每隔一個循環 意義 退火溫度 方式 進行10個左右的循環 使用簡併引物即可以進行“Touchdown PCR”。由這種方法將獲得大量的產物,但因為由...
反轉錄PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR),是指以mRNA為模板 在反轉錄酶作用下合成的cDNA 第一鏈的PCR。該反應分為兩步,第一步在單引物的介導和反轉錄...
首次報導的PCR所用的DNA聚合酶是大腸桿菌的DNAPolymerase I的Klenow大片段,其酶活性在90℃會變性失活,需每次PCR循環都要重新加入Klenow大片段,同時引物是在37℃...
SSR(Simple Sequence Repeats)標記是近年來發展起來的一種以特異引物PCR為基礎的分子標記技術,也稱為微衛星DNA(MicrosatelliteDNA),是一類由幾個核苷酸(一般為1~6個...
1)內參照法:在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用螢光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在...