形成引物二聚體及髮夾結構的能值,在錯配位點的引發效率,引物及產物的GC含量等等。必要時還需對引物進行修飾,如增加限制性內切酶位點,引進突變等。
基本介紹
- 中文名:PCR引物合計
- 原則:引物與模板的序列要緊密互補
- 注意事項:引物的長度一般為15~30bp
- 過程:對引物修飾一般在5'端進行
形成引物二聚體及髮夾結構的能值,在錯配位點的引發效率,引物及產物的GC含量等等。必要時還需對引物進行修飾,如增加限制性內切酶位點,引進突變等。
PCR引物合計注意事項 編輯 1、 引物的長度一般為15~30bp,常用的是18~27bp,但不應大於35bp ,因為過長會導致其延伸溫度大於74℃,不適於Taq DNA聚合酶進行反應...
PCR引物設計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,使其能有效地擴增模板DNA序列。引物的優劣直接關係到PCR的特異性與成功與否。...
存在有自然中生物的DNA複製引物(RNA引物)和聚合酶鏈式反應(PCR)中人工合成的引物(通常為DNA引物)。一般所說引物,指DNA引物,以下簡稱引物。...
基於PCR原理三步驟而設定變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中採用三溫度點法,雙鏈DNA在90~95℃變性,再迅速冷卻至40 ~60℃,引物退火併結合到靶序列上,...
反轉錄PCR (reverse transcription PCR,RT-PCR),是指以mRNA為模板 在反轉錄酶作用下合成的cDNA 第一鏈的PCR。該反應分為兩步,第一步在單引物的介導和反轉錄...
ASPCR的基本構思是設計2個ASO引物,使之與另一引物構成PCR反應體系。這2個引物與探針的ASO不同,等位基因特異性鹼基不是位於ASO中間,而是置於引物的3′端。這種...
錨定PCR(Anchored PCR)常用於擴增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴,然後分別用多聚dC和已知的序列作為引物進行PCR擴增。...
競爭引物PCR(COP-PCR)針對靶DNA一個側點突變設計出兩個等位特異性寡核苷酸(allele specific oligonucleotide,ASO),一個為正常引物,一個為突變引物。與AS-PCR(...
RT -PCR即逆轉錄-聚合酶鏈反應。原理是:提取組織或細胞中的總RNA,以其中的mRNA作為模板,採用Oligo(dT)或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。再以cDNA為模板進行...
螢光定量通過螢光染料或螢光標記的特異性的探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時線上監控反應過程,結合相應的軟體可以對產物進行分析,計算待測樣品模板的初始濃度。...