突變擴增系統(amplification refractory mutation system,ARMS)又稱等位基因特異性擴增法(allele specific amplification,ASA)，是Newton等首先建立用來檢測已知突變的方法。其基本原理是，如果引物的3′端鹼基與模板鹼基不互補，則用一般耐熱DNA聚合酶無法延伸。因此根據已知點突變設計3條引物(見引物設計)，其3′端鹼基分別與突變和正常的模板鹼基互補，從而將有某種點突變的模板與正常模板區分開來。此法已用於多種疾病的點突變的檢測.
基本介紹
- 外文名：ARMS-PCR
- 基本原理：鹼基不互補耐熱DNA聚合酶不延伸
- 意義：用於多種疾病的點突變的檢測
概念,構思,
概念
ASPCR是一項在PCR基礎上發展起來的新方法，通過PCR和凝膠電泳即可檢測出DNA中各種點突變。
構思
ASPCR的基本構思是設計2個ASO引物，使之與另一引物構成PCR反應體系。這2個引物與探針的ASO不同，等位基因特異性鹼基不是位於ASO中間，而是置於引物的3′端。這種設計是基於耐熱Taq DNA聚合酶缺乏3′→5´外切校正活性的特點。引物3′端的特異鹼基分別互補於野生型和突變型等位基因的相對鹼基，若此鹼基對形成錯配，鏈延伸反應就會因3′,5´-磷酸二酯鍵形成障礙而受阻，故此法又稱擴增受阻突變體系（amplification refractory mutation system , ARMS）。其擴增結果為：“野生”模板阻礙,“突變”引物放大；或“突變”模板阻礙,“野生”引物放大。
ASPCR點突變的檢出率依賴於反應條件的最佳化和防止引物與靶DNA錯配時可能發生的錯配延伸，這可通過調整實驗條件如：引物、靶DNA、Taq酶的濃度和反應溫度等來提高特異性，在反應體系中加入甲醯胺亦可減少非特異性擴增。還可通過人為地使引物3′末端的第二個鹼基發生錯配來阻止錯誤延伸。
近來又有報導：在ARMS的反應體系中，引物上標記2個不同螢光素，通過對產物螢光分析即可了解到模板中是否存在點突變，此法稱為雙螢光擴增受阻突變系統（double fluorescent-amplification refractory mutation system, dFARMS）
