生物樣品

生物樣品

生物樣品通常是指植物的花、葉、莖、根、種子等,動物(包括人)的體液(如尿、血、唾液、膽汁、胃液、淋巴液及生物體的其他分泌液等)、毛髮、肌肉和一些組織器官(如胸腺胰腺、肝、肺、腦、胃、腎等)以及各種微生物。

基本介紹

  • 中文名:生物樣品
  • 外文名:biological sample
  • 分類:植物樣品、動物樣品等
採集原則,一般原則,採集方法,動物樣品,生物樣品,樣品製備,

採集原則

一般原則

1、代表性
選擇一定數量的能符合大多數情況的植株為樣品。採集作物或蔬菜時,不要選擇田埂邊上及離田埂2m範圍以內的樣品;如採集水生植物,則應注意離開污水排放口適當距離。
2、典型性和適時性
採樣的部位要能充分反映所了解的情況,這就是典型性。而適時性是根據研究的目的和環境污染物對植物的影響,必須按照植株的生長狀況,發育階段以及植株的不同部位,如根、莖、葉和果實或具體要求進行分別採樣。為了植株同一部分進行比較分析,不能將植株的上、下部位隨意混合。

採集方法

1、採樣前的準備工作
採樣前應預先準備好採集工具,如小鏟、枝剪、剪刀、布和塑膠袋等,還有標籤、記錄本、樣品採集登記表等物品。
2、樣品採集量
樣品採集量主要是考慮樣品部位處理後的代表性及是否夠測定用。為了保證足夠的數量,一般要求至少有20~50g乾樣品,最好有1kg乾樣。如果是新鮮的樣品,以含80%~90%的水分來計算,要比干樣量多5~10倍,最好5~10kg。總之應以不少於0.5kg新鮮樣品為原則。對水生植物、水果、蔬菜等含水量高的植物,採樣量還需酌情增加。
3、樣品的採集在已選好的樣區做成樣方,草木及農作物樣區為1m×1m,灌木植物2m×2m,禾木群落10m×10m。在樣方區內選擇優勢種的植物分別採集根、莖、葉。對於農作物、蔬菜及草本植物,在各樣區內采5~10個樣品。對於灌木和喬木群落應該按草木、灌木、喬木分層採樣並編號。在採集測定樣品的同時,對優勢種還應採集標本以作簽定植物科、屬之用。
生物樣品
圖1
一般在各採樣小區內採集一個代表樣品,此代表樣品是在這塊地中分散於5~10處,採取5~10個樣品混合組成的。採樣點的布置方法以梅花形五點取樣,或在小區內平行前進以互動間隔方式取樣,如圖1所示。
4、樣品的保存
將採集好的樣品裝入布口袋,並附上編寫好樣品號的標籤。採集時必須做好野外調查記錄和樣品採集登記表。對一些特殊情況也應進行記錄,以便查對和分析數據時參考。採集好的樣品應儘快送往實驗室,運輸時要注意通風乾燥,以防樣品發霉腐爛,最好為冷藏運輸。用四分法或八分法選取樣品。用新鮮樣品進行檢測時,應立即送往實驗室,充分洗滌、搗碎處理和檢測。如當天難以處理,鮮檢樣品應該暫時冷藏在冰櫃內。其餘樣品可在通風乾燥處晾乾,去掉灰塵、雜物、脫殼、磨碎,通過1mm篩孔,儲存在磨口廣口玻璃瓶中備用。

動物樣品

動物的各部分組織均可以分別作為採集對象,但通常是用尿、血液、毛髮和指甲等。
1、動物的血液
動物一般多用耳緣靜脈取血,先去毛,要去淨毛,不傷皮膚,用體積分數為75%的酒精擦動物耳朵,例如兔耳朵,用燈泡照射加熱使其血管充血,用大頭針刺破靜脈放血(先從遠心端刺),將血液放入抗凝杯中,邊收集邊搖勻,以防凝固。
2、動物的尿液
為收集動物的尿液,可將動物放在代謝籠中,使動物的尿液可經下漏斗流入採樣瓶中。一般晨尿濃度較高,可一次收集,也可收集2h甚至24h的尿液。
3、 頭髮和指甲
頭髮作為樣品的主要優點是:採樣時受檢者無痛、無創傷。樣品容易貯存和運送,不需特殊容器;樣品不易變質,可長期保存等。

生物樣品

在生物樣品的測定中,根據測定項目的不同,首先要經過消解(或灰化),或提取和分離等處理工作,然後才能進行待檢組分含量的測定。處理生物樣品的方法有消解法 (又稱濕法氧化或消化法,主要有硝酸-硫酸消解法、硝酸-高氯酸消解法、硫酸-過氧化氫消解法)、灰化法 (又稱燃燒法或高溫分解法)、提取法(包括振盪提取、組織搗碎、索氏提取器提取)、分離法和濃縮法。

樣品製備

植物待檢樣品的製備
1、新鮮樣品的製備
測定植物樣品中易轉化或易降解的即易起變化的物質(如酚、氰、有機農藥等)及多汁的瓜果、蔬菜樣品,應在新鮮狀態下進行測定。製備這些樣品時,先將各平均樣品用清水、去離子水(或重蒸餾水)洗淨(受大氣污染的樣品還應先用洗滌劑洗),並用乾淨紗布輕輕擦洗。然後切碎、混合均勻。如蔬菜樣品可稱取100g放入電動搗碎機的搗碎杯中,加同樣質量的蒸餾水或去離子水,含水分多的樣品也可以不加水(如熟透的西紅柿),含水少的樣品可加兩倍於樣品的水。待檢樣品按實際質量稱量。打碎製成均勻漿狀。含纖維較多或較硬的樣品,如禾本科植物莖稈、葉子等,不能用搗碎機搗碎,可用不鏽鋼刀或剪刀切成小碎塊或碎片,混合均勻備測定用。
2、烘乾樣品的製備
用乾樣進行檢測的樣品通常要經過如下處理:
(1)清除污物
任何灰塵、泥土、肥料、農藥等沾污物均會影響測定結果的準確性,所以必須在烘樣前擦刷或用清水、0.1%~0.3%的去污物劑和去離子水等清除樣品上的污物,清洗的操作必須迅速,以免溶液和樣品長時間接觸而引起某些成分如鉀、鈣的損失。
(2)樣品的烘乾
經擦淨或洗淨的樣品,如果不用鮮樣進行測定,最好儘快在鼓風乾燥箱(或在低溫真空乾燥箱中)烘乾,以防發霉變質,並減少化學和生物的變化。烘乾時要注意適宜的溫度,溫度過高時,會引起易揮發元素的損失。
(3)樣品的研磨
為使樣品的組成更為均勻和易於處理,須將烘乾的樣品進行研磨粉碎並混合均勻,穀類的果實樣品須先脫殼再進行粉碎。
用於測定金屬元素的樣品,研磨時應注意金屬器械對樣品的污染問題,如測定樣品中的鉻等含量時,不能用鋼製粉碎機,而用玻璃研缽碾碎,過篩最好用尼龍篩,否則會有錳、鎳等元素的污染。總之,在測定樣品中的微量元素時,最好是使用瑪瑙研缽研碎,以免因再次受到污染引起誤差。粉碎磨好的樣品儲存於聚乙烯瓶或磨口廣口玻璃瓶中備用。
動物待檢樣品的製備
1、血、尿待檢樣品的製備
(1)全血的製備
環境生物測定中所用的全血是抗凝的全血,即在取出人(或動物)的血液後,必須立即與適量的抗凝劑充分混合,以免血液凝固。為了使血液注入容器後均勻的與抗凝劑接觸,必須使抗凝劑能在容器底部鋪成薄層,這可在烘乾時轉動容器來實現。取血量為數毫升時一般用試管儲血。用上述方法準備的加有抗凝劑的試管稱為抗凝試管。
(2)血漿的製備
環境生物污染測定中所用的血漿也是抗凝血漿。製備方法是將抗凝血在離心機中離心,使血細胞下沉,這樣所得的上清液即為血漿。在血漿製備過程中應防止溶血,故要求採取血液時所用的注射器、針頭等都需清潔乾燥,取得全血後也要避免劇烈震動。
(3)血清的製備
血清是指血液凝固後自行析出的液體。製備血清的方法是採取血液,不加抗凝劑,在室溫下使其凝固,通常經3h後血塊收縮析出血清,離心分離,吸取上清液即為血清。製備血清也要防止溶血,故所用設備必須乾燥,且在血塊收縮後及早分出血清。
(4)無蛋白質血液的製備
在環境生物污染測定中有時須避免蛋白質的干擾(常與試劑發生渾濁或沉澱),常用沉澱蛋白質的試劑除去血液中的蛋白質,而保留應測定的化學成分,這種操作稱為無蛋白血液的製備。無蛋白血濾液的製備應根據具體檢測要求來選擇沉澱蛋白質的試劑。
2、動物組織和器官待檢樣品的製備
離體不久的組織在適宜的溫度和pH值條件下,可以進行一定程度的物質代謝。所以在生物測定中,常利用離體組織製成不同的組織樣品,用來研究生物化學變化。常用的組織製品有:組織糜、組織勻漿、組織提取液。
(1)組織糜:將新鮮組織用剪刀迅速剪碎,再與砂及適當的緩衝液磨碎或用絞肉機絞成糜狀。
(2)組織勻漿:新鮮組織稱量後剪碎,加入適當的勻漿製備液,用高速組織搗碎機攪碎組織而製成勻漿。如果組織量較少,可在剪碎組織後用組織勻漿器磨成勻漿。
(3)組織提取液 將組織勻漿經過細紗布過濾的液體或經離心去沉澱後的上清液,即為組織提取液。

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