基本介紹
- 中文名：光學和電子顯微鏡樣品製備
- 外文名：optical and electron microscopy，preparation of specimens for
- 製片法包括：切片法整體封片法塗片法壓片法
- 技術類型：顯微鏡下觀察的薄片的技術
製片法,技術,
製片法
顯微製片法一般包括切片法、整體封片法、塗片法和壓片法4類。①切片法。光學顯微鏡的切片厚度在2～25微米之間，一般動植物材料的切片以厚10微米左右為合適。切片法根據包埋劑的不同而有所不同。常用的是石蠟切片法、棉膠切片法、冰凍切片法、乙二醇甲基丙烯酸脂法(簡稱GMA法)。石蠟切片法包括固定、包埋、切片、染色、脫水和封固等步驟。關鍵是把生物材料用石蠟包埋，以石蠟為支持物，把浸在蠟塊中的生物材料切成理想的薄片。操作過程為：固定→水洗→從低濃度逐級到高濃度酒精脫水→二甲苯透明→浸蠟→包埋→切片→貼片→二甲苯脫蠟→逐級從高濃度到低濃度酒精處理，最後過渡到水→染色→逐級從低濃度到高濃度酒精脫水→二甲苯透明→樹脂膠封固。其中的基本步驟在各種製片技術中都是相同的。②整體封片法。用於單細胞、微小生物體或分散的器官的整裝製片方法。此法也需要經過固定、染色、脫水、透明和封固各個步驟。草履蟲和昆蟲口器製片即用此法。③塗片法。把易於分散的生物標本塗布在載玻片上的製片方法。血液塗片便是一例。④壓片法。將天然的、易於分散的組織或經過處理後易於分散的組織，如動物的精母細胞、根尖細胞等放在載玻片上、再加蓋玻片，用力壓碎組織，使細胞或細胞內的結構鋪展成一層的製片方法。壓片法常用於觀察染色體，通常用醋酸洋紅、地衣紅和石炭酸復紅染色。
技術
透射電子顯微鏡製片技術
透射電子顯微鏡製片技術 其基本要求是：①儘可能保持材料的結構和某些化學成分生活時的狀態。②材料的厚度一般不宜超過1000埃。組織和細胞，必須製成薄切片，以獲得較好的解析度和足夠的反差。③採用各種手段，如電子染色、投影、負染色等來提高生物樣品散射電子的能力，以獲得反差較好的圖像。
樣品製備的方法隨生物材料的類型以及研究目的而各有不同。對生物組織和細胞等，一般多用超薄切片技術，將大尺寸材料製成適當大小的超薄切片，並且利用電子染色、細胞化學、免疫標記及放射自顯影等方法顯示各種超微結構、各種化學物質的部位及其變化。對生物大分子（蛋白質、核酸）、細菌、病毒和分離的細胞器等顆粒材料，常用投影、負染色等技術以提高反差，顯示顆粒的形態和微細結構。此外還有以冷凍固定為基礎的冷凍斷裂——冰凍蝕刻、冷凍置換、冷凍乾燥等技術。
掃描電子顯微鏡樣品製備技術
