基本介紹
- 中文名：原子原位雜交
- 外文名：In situ molecular hybridization
基本介紹,套用平台,技術分類,
基本介紹
原子原位雜交（In situ molecular hybridization）技術是將細胞或組織切片固定於載玻片上，使細胞中DNA或RNA在保持原來位置條件下，與標記的核酸進行原位雜交反應，通過放射自顯影檢測和顯微鏡觀察，對被雜交的DNA進行定位、定量分析或觀察基因表達水平。
其原理為：DNA分子雙鏈的形成、DNA的複製、轉錄都依賴於鹼基互補配對關係。2條核酸單鏈，其中一條的剪輯順序適合與另一條的剪輯一次互補配對，可在一定條件下形成核酸複合體；這種複合體形成的現象稱為核酸的分子雜交。
套用平台
檢測兩種核酸分子鹼基排列有無互補關係或互補程度的技術。通常為微量操作，進行反應時需要用標記的核酸分子探針，最後借放射性測量或其他檢測手段進行識別判斷。
技術分類
基因組原位雜交(Genomeinsituhybridization，GISH)技術是20世紀80年代末發展起來的一種原位雜交技術。它主要是利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當的濃度作封阻，在靶染色體上進行原位雜交。GISH技術最初套用於動物方面的研究(Pinkeletal.,1986)，在植物上最早套用於小麥雜種和栽培種的鑑定(余舜武等2001;王文奎等2000)。
螢光原位雜交(Fluorescenceinsituhybridization，FISH)技術是在已有的放射性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非放射性DNA分子原位雜交技術。它利用螢光標記的核酸片段為探針，與染色體上或DNA顯微切片上的特異fl-N：~行雜交，通過螢光檢測系統(螢光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列，進而確定其雜交位點。FISH技術檢測時間短，檢測靈敏度高，無污染，已廣泛套用於染色體的鑑定、基因定位和異常染色體檢測等領域。FISH是原位雜交技術大家族中的一員，因其所用探針被螢光物質標記(間接或直接)而得名，該方法在80年代末被發明，現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是螢光標記的核酸探針在變性後與已變性的靶核酸在退火溫度下復性;通過螢光顯微鏡觀察螢光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA螢光標記探針是其中最常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平的分析。螢光標記控針不對環境構成污染，靈敏度能得到保障，可進行多色觀察分析，因而可同時使用多個探針，縮短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。
3多彩色螢光原位雜交技術
多彩色螢光原位雜交(Multicolorfluorescenceinsituhybridization，mFISH)是在螢光原位雜交技術的基礎上發展起來的一種新技術，它用幾種不同顏色的螢光素單獨或混合標記的探針進行原位雜交，能同時檢測多個靶位，各靶位在螢光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現多種色彩，因而被稱為多彩色螢光原位雜交。它克服了FISH技術的局限，能同時檢測多個基因，在檢測遺傳物質的突變和染色體上基因定位等方面得到了廣泛的套用(楊明傑等1998)。
