p53/PXR調控肝細胞脂質生成誘導NAFLD發病的作用及分子機制

《p53/PXR調控肝細胞脂質生成誘導NAFLD發病的作用及分子機制》是依託浙江大學，由曾行擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：p53/PXR調控肝細胞脂質生成誘導NAFLD發病的作用及分子機制
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：曾行
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）是高發慢性肝病，其發病機制尚未完全清楚。我們前期研究發現NAFLD小鼠肝細胞p53表達水平增高、抑制p53顯著減輕肝細胞脂變，並且NAFLD小鼠肝臟中孕烷X受體（PXR）活性下降，但機制不明。近年報導p53可拮抗肝臟中PXR，且PXR沉默可引起醛-酮還原酶1B10（AKR1B10）及其下游脂質合成酶乙醯輔酶A羧化酶（ACC）的表達上升。本項目擬採用靶基因過表達與siRNA沉默或敲除、雙螢光素酶報告基因等技術及NAFLD細胞模型和小鼠模型，探討並闡明p53通過拮抗PXR，解除對其下游基因AKR1B10的抑制，來上調脂質合成酶ACC表達及活性，從而參與NAFLD發病的作用及分子機制，為p53/PXR相關的NAFLD發病分子機制提供新觀點。

結題摘要

研究背景與研究目的：P53作為腫瘤抑制基因，近年來被報導可能參與非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的發病過程中。孕甾烷X受體(PXR)是來自核受體超家族，被發現能夠誘導脂質合成基因SCD1的表達從而也參與NAFLD當中。P53與PXR在腸道細胞中也被報導存在相互作用。本研究目的是闡明肝細胞中p53-PXR相互作用調控SCD1參與NAFLD的發病過程。方法：雄性p53野生型與敲除小鼠（8-10周）分別隨機分為普通飼料（SCD）和高脂飼料（HFD）餵養處理組以建立體內NAFLD模型。HepG2細胞與小鼠原代肝細胞以棕櫚酸（PA）處理以建立NAFLD體外模型。肝內/胞內甘油三酯水平及油紅O染色用來評價NAFLD嚴重程度。P53激動劑Nutlin-3a在體內和體外被用來激活p53通路。小分子干擾siRNA在細胞水平用來敲低p53和PXR的表達。29T細胞上進行免疫共沉澱試驗來證明P53與PXR之間的蛋白相互作用。螢光素酶報告基因試驗用來檢測SCD1啟動子區域PXR結合元件的轉錄活性。主要結果：與野生型小鼠相比，P53敲除小鼠呈現減輕的NAFLD症狀。在細胞模型中，p53敲低也可以顯著逆轉PA誘導的脂變。NAFLD造模體內及體外均誘導p53與PXR的核轉位，然而在p53敲除小鼠或者p53敲低的細胞中無此變化。在HepG2細胞上證實p53與PXR有蛋白相互作用。P53激動劑在體內體外均可誘導PXR的核轉位，而在p53敲除小鼠或p53敲低的細胞中無此變化 。p53激動劑能誘導SCD1啟動子PXRE區域的轉錄活性，該作用可被PXR敲低所阻斷。在細胞模型中，PXR敲低可阻斷p53敲低對PA誘導的脂變的改善作用。結論：P53可通過與肝臟PXR相互作用，誘導SCD1的表達從而促進NAFLD的發生髮展。