《microRNA-122/33調控SREBP-1c介導的草魚脂代謝的作用及機理研究》是依託河南師範大學，由盧榮華擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-122/33調控SREBP-1c介導的草魚脂代謝的作用及機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：盧榮華
- 依託單位：河南師範大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
養殖魚類普遍存在由於脂肪過度蓄積而導致的肝脂質代謝紊亂問題。研究發現microRNAs參與了陸上動物脂代謝過程，但其在魚類中的作用並不清楚。我們在前期研究中發現，草魚miR-122/33與肝脂代謝關係密切，且在SREBP-1c 3’UTR區有潛在結合位點。在此基礎上，本項目擬以成功建立的草魚脂變肝細胞及活體模型為材料，通過構建miR-122/33超表達和干擾載體，採用Western blot、qRT-PCR及酶活性測定等技術手段，檢測miR-122/33對脂代謝生化指標、關鍵基因表達及酶活性等的影響，研究miR-122/33在肝脂代謝中的功能；採用螢光素酶報告基因系統檢測miR-122/33和SREBP-1c 3’UTR的靶標關係，以期闡釋miR-122/33調控SREBP-1c介導的草魚脂代謝的分子機制。研究結果可為提高草魚脂肪利用能力和預防脂肪肝等代謝綜合症的發生提供新的科學依據。
結題摘要
摘要：養殖魚類普遍存在由於脂肪過度蓄積而導致的肝脂質代謝紊亂問題。以往研究發現miRNAs 通過作用於靶基因對脂肪的合成及分解等代謝生理過程起到重要調控作用。本項目通過高通量測序技術篩選出與肝臟脂肪代謝密切相關的miR-33/122, 構建了草魚活體及細胞脂肪肝模型，並在細胞與活體水平上解析了miR-33/122調節魚類肝脂代謝的過程以及分子機制。主要研究成果包括：（1）成功構建了高糖高脂飼料誘導的脂肪肝miRNA 文庫，採用Hiseq深度測序技術，篩選出高糖高脂誘導下差異表達的miRNAs;（2）成功克隆了關鍵miRNA作用途徑相關靶標基因SREBP-1的cDNA全長和3'UTR區; 並成功構建了SREBP-1 3'UTR螢光素酶報告基因載體，驗證了SREBP-1是miR-33的候選靶基因。（3）採用細胞轉染和腹腔注射miR-33/122的 mimic（tagonir）和agomir（antagonir）的方法，在細胞和活體水平上研究了miR-33/122的功能。結果表明，miR-33/122二者均可通過正向調節脂代謝和免疫相關基因等的表達在草魚肝脂代謝紊亂過程中發揮重要作用，但二者的調節細節不同。（4）採用葡萄籽原花青素（GSPE）和草魚肝細胞共孵育及草魚腹腔注射GSPE的方法，發現GSPE能通過抑制miR-33和miR-122的表達進而調節一系列脂代謝和免疫相關基因有關。研究結果為豐富魚類脂代謝調控機理提供了基礎資料，為防治魚類營養性脂肪肝等代謝性疾病及提高機體免疫力提供了思路及理論基礎。
