《caspase-8在Fas凋亡信號傳導通路中的調控作用研究》是依託上海交通大學，由李玉峰擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：caspase-8在Fas凋亡信號傳導通路中的調控作用研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：李玉峰
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Fas誘導細胞凋亡的信號傳導通路有兩條（線粒體依賴或者線粒體非依賴通路），一種細胞只選擇其中一條信號傳導通路傳導凋亡信號。凋亡信號傳導通路的選擇機制尚不明了，為了闡明這種選擇機制，本研究擬以信號傳導通路調控關鍵分子Caspase-8為研究的切入點，採用流式細胞儀、Western blot等方法證明Caspase-8的活化速度與細胞凋亡通路選擇的非相關性，通過對比不同凋亡信號傳導通路細胞Caspase-8的活化片段來明確與凋亡信號傳導通路選擇相關的活化片段。通過特異性抗體阻斷相關的Caspase-8的活化片斷來進一步明確活化片段的特異性酶切活性。最後通過抑制細胞內的磷酸化酶或者蛋白降解酶來明確產生不同caspase-8活化片段的機理。此研究的意義在於為進一步闡明Fas誘導細胞凋亡的信號傳導通路的選擇機制提供科學的試驗數據，為開發臨床化療新藥提供新思路。
結題摘要
Fas 誘導細胞凋亡的信號傳導通路有兩條（線粒體依賴或者線粒體非依賴通路），TypeⅠ型細胞通過線粒體非依賴通路傳導凋亡信號，TypeⅡ型細胞通過線粒體依賴通路傳導凋亡信號。一種細胞只選擇其中一條信號傳導通路傳導凋亡信號。凋亡信號傳導通路的選擇機制尚不明了，為了闡明這種選擇機制，本研究以信號傳導通路調控關鍵分子Caspase-8 為研究的切入點，採用流式細胞儀、Western blot 等方法證明Caspase-8 的活化速度與細胞凋亡通路選擇的非相關性。通過共聚焦顯微鏡觀察發現TypeⅠ型細胞和TypeⅡ型細胞在Fas受體內化上無明顯差別。TypeⅠ型細胞的Bid分子能夠被人工合成的活化Caspase-8酶切成活化tBid分子，證明TypeⅠ型細胞的Bid分子不存在切割位點的變異，TypeⅠ型細胞不能通過線粒體傳導凋亡信號不是因為Bid分子存在變異，而是缺乏活化Bid分子的特異性酶，通過特異性抗體阻斷相關的Caspase-8 的活化片斷來進一步明確活化片段的特異性酶切活性。通過對比不同凋亡信號傳導通路細胞Caspase-8 的活化片段發現凋亡信號傳導通路的選擇與Caspase-8 的p18片段有關。線粒體非依賴的TypeⅠ型細胞不表達Caspase-8 的p18片段，p18活化片段只表達線上粒體依賴的TypeⅡ型細胞中。通過基因測序發現TypeⅠ型細胞和TypeⅡ型細胞的Caspase-8 活化切割位點不存在基因變異，因此Caspase-8 的活化片斷的差異可能源於蛋白質的磷酸化不同或者蛋白降解酶活性的高低，最後通過抑制細胞內的磷酸化酶或者蛋白降解酶未能發現caspase-8 活化片段的差異。此研究初步闡明了Fas 誘導細胞凋亡的信號傳導通路的選擇機制，Caspase-8活化方式或活化程度的不同決定了凋亡信號傳導通路的選擇。
