《Fas/FasL系統凋亡因子FADD在牛卵泡發育中的作用機制研究》是依託吉林大學，由楊潤軍擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Fas/FasL系統凋亡因子FADD在牛卵泡發育中的作用機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：楊潤軍
- 依託單位：吉林大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
牛卵泡發育和閉鎖受多種信號分子及通路調控。Fas/FasL系統是近年來新發現的調控卵泡發育和閉鎖的重要信號轉導通路，FADD作為信號通路的接頭蛋白，在此通路中起關鍵作用。本研究擬以牛卵泡顆粒細胞及成熟卵泡、閉鎖卵泡為研究材料，採用實時定量PCR和蛋白質組學技術手段闡明FADD在牛成熟卵泡和閉鎖卵泡中的表達規律；在此基礎上，利用RNA干擾及基因免疫技術分別阻斷和激活Fas/FasL通路，通過Annexin V-FITC染色、電鏡掃描和細胞流式分析卵泡顆粒細胞的凋亡情況；同時利用ELISA檢測FADD在活體中的免疫原性及生殖激素水平的變化，初步探索FADD在體內和體外對卵泡顆粒細胞增殖和凋亡的調控作用機制，為進一步揭示FADD等凋亡因子調控牛卵泡發育的機理開闢一條新的途徑，同時也為開發提高母牛繁殖效率的DNA疫苗奠定分子生物學基礎。
結題摘要
Fas/FasL系統是近年來新發現的調控卵泡發育和閉鎖的重要信號轉導通路，FADD和FasL作為信號通路中的重要調控蛋白，在此通路中起關鍵作用。本研究在國家青年科學基金項目的資助下針對FADD、FasL在體內和體外對卵泡顆粒細胞增殖和凋亡的調控作用機制進行了系統研究，對於進一步了解FADD、FasL等凋亡因子調控牛卵泡發育的機理提供了新的思路。通過為期三年的研究，完成了FADD基因功能結構域的生物信息學分析，研究了FADD基因在母牛不同組織器官中的表達譜、揭示了FADD在青年母牛和成年母牛成熟和閉鎖卵泡顆粒細胞中的表達規律，在此基礎上完成了干擾載體pSuper-FADD-shRNA和高表達載體pAcGFP-FADD的構建及體外轉染實驗，揭示了FADD過表達及被干擾後對牛卵泡顆粒細胞的增殖調控作用。同時構建了FADD起始誘導因子FasL免疫載體進行了小鼠和母牛活體免疫實驗，在體內研究了FasL二次加強免疫後後對雌性動物發情、排卵等繁殖性能的作用。項目完成了預期研究的主要技術和經濟指標，課題研究過程中發表研究論文11篇，其中SCI論文7篇，獲得吉林省自然科學學術成果獎二等獎一項，申報國家發明專利1項，組織承辦中國畜牧獸醫學會畜禽遺傳標記學分會學術研討會一次，副主編和參編專著2部，培養和協助培養博士研究生1名，碩士研究生3名。
