SHH信號通路調控人前列腺癌細胞EMT轉化的分子機制研究

SHH信號通路調控人前列腺癌細胞EMT轉化的分子機制研究

《SHH信號通路調控人前列腺癌細胞EMT轉化的分子機制研究》是依託西安交通大學,由朱國棟擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

  • 中文名:SHH信號通路調控人前列腺癌細胞EMT轉化的分子機制研究
  • 項目類別:青年科學基金項目
  • 項目負責人:朱國棟
  • 依託單位:西安交通大學
中文摘要,結題摘要,

中文摘要

前列腺癌的侵襲、轉移是一個多環節、多步驟的動態演進過程,EMT是該過程的始動環節,抑制癌細胞的EMT轉化,可從龍頭上遏制前列腺癌的遠處轉移。SHH信號通路不僅與前列腺的器官發育密切相關,還參與了前列腺癌的發生、演進及轉移過程。但SHH信號通路是怎樣調控前列腺癌的侵襲轉移?SHH信號通路與前列腺癌細胞EMT轉化之間是否存在關聯?總結我們前期對SHH信號通路及EMT現象在人前列腺器官發育中的研究,並結合我們對人前列腺癌ARCaP細胞系的研究結果,提出SHH信號通路可能調控前列腺癌ARCaP細胞系發生EMT轉化的研究假設。探討激活SHH信號是否可誘導ARCaPE 細胞發生EMT轉化;封閉SHH信號是否可逆轉ARCaPM細胞的EMT狀態,從而揭示SHH信號與前列腺癌ARCaP細胞系EMT轉化之間的可能關係,闡明其重要分子機制。為進一步探索阻斷前列腺癌細胞EMT轉化的分子靶點奠定理論及實驗依據。

結題摘要

本課題初步探尋了Sonic hedgehog(SHH)信號通路是如何介導ARCaPE細胞發生EMT轉化,進而增強細胞侵襲、轉移活性的。課題從以下幾方面展開:①RT-PCR及Western blot鑑定ARCaP細胞系EMT標誌性蛋白,並檢測SHH信號通路蛋白表達,提示SHH通路在上述兩個細胞中均存在激活現象,但與ARCaPE相比,ARCaPM表達較高水平的SHH及GLI-1。②分子克隆技術構建SHH基因真核表達質粒,在體外轉染ARCaPE細胞,篩選並鑑定過表達SHH的ARCaPE細胞穩定克隆。③過表達SHH後,ARCaPE細胞由鋪路石樣轉化為紡錘形,與ARCaPM細胞的形態非常接近;Western blot檢測提示,過表達SHH後,其上皮細胞標誌物表達水平下調或缺失,間質細胞的標誌物表達水平不同程度上調,提示SHH信號通路可能參與誘導ARCaPE細胞發生EMT轉化。④Transwell及細胞劃痕實驗證實,SHH信號通路激活可顯著增強ARCaPE細胞的體外侵襲、轉移活性。⑤Cyclopamine處理體外培養的ARCaPM細胞,阻斷其SHH信號通路後,進一步行MTT檢測證實細胞增殖顯著抑制,流式細胞技術證實細胞凋亡顯著增強。Transwell及細胞劃痕實驗提示,阻斷SHH信號通路可使ARCaPM細胞的體外侵襲、轉移活性明顯減弱。⑥Western blot檢測發現SHH信號通路可顯著上調EMT轉化調控因子ZEB1,誘導ARCaPE細胞發生EMT轉化,進而顯著上調侵襲轉移相關蛋白MMP-9,增強ARCaPE細胞體外侵襲、轉移活性。⑦裸鼠皮下成瘤實驗顯示接種過表達SHH的ARCaPE細胞組裸鼠平均成瘤時間顯著短於對照組裸鼠,腫瘤平均體積顯著大於對照組;免疫組化檢測顯示該組裸鼠皮下瘤組織中SHH、GLI-1、Vimentin、ZEB-1以及MMP9的表達均顯著高於對照組,但E-Cadherin的表達低於對照組。本課題初步研究結果撰寫的會議論文摘要,已被美國泌尿外科學會(AUA)接收,將於2013年AUA年會期間做國際學術交流。已發表Medline收錄文章1篇,另有1篇英文文章已投稿SCI收錄雜誌。課題不僅在一定程度上解釋了SHH通路激活為何能促使前列腺癌發生侵襲、轉移的這一科學問題,並為進一步深入研究靶向SHH信號,進而抑制前列腺癌侵襲、轉移的套用型研究奠定了堅實的理論基礎。

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