RIG-G基因抑制肺腺癌細胞增殖的作用與機制

《RIG-G基因抑制肺腺癌細胞增殖的作用與機制》是依託同濟大學，由李冬擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：RIG-G基因抑制肺腺癌細胞增殖的作用與機制
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：李冬
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

我們的前期研究發現RIG-G是一個重要的腫瘤抑制基因，促進細胞周期停滯是其抑制腫瘤細胞增殖的機制。近來證實RIG-G在肺癌中具有極大的誘導表達潛力，同時又發現細胞周期的上調是肺癌細胞增殖的重要原因。推測RIG-G有望用於肺癌的增殖控制。為此，本研究擬以肺腺癌為研究對象，採用Tet-off表達系統和RNA干擾轉染技術上調/下調細胞RIG-G的表達，分別檢測轉染腫瘤細胞的增殖能力；隨後藉助蛋白質晶片和western blot 技術檢測轉染腫瘤細胞增殖信號等重要信號分子和信號轉導通路的表達與活化；進而利用染色體免疫沉澱，免疫共沉澱，螢光素酶報告基因，凝膠過濾層析等細胞和分子生物學技術研究RIG-G在肺腺癌細胞中抗腫瘤作用的分子機制；最後明確RIG-G對小鼠肺癌模型腫瘤細胞生長的抑制作用。為闡明RIG-G抗肺癌增殖的作用、機制與套用價值提供實驗依據。

結題摘要

RIG-G是一個重要的腫瘤抑制基因，促進細胞周期停滯是其抑制腫瘤細胞增殖的機制。近來證實RIG-G在肺癌中具有極大的誘導表達潛力，同時又發現細胞周期的上調是肺癌細胞增殖的重要原因。推測RIG-G有望用於肺癌的增殖控制。我們的目的是明確RIG-G具有抑制NSCLC腺癌細胞生長和增殖作用以及闡明RIG-G在肺腺癌細胞中抗腫瘤作用的分子機制。我們的研究發現過表達RIG-G降低肺癌細胞的增殖，抑制小鼠移植瘤的生長。沉默Rig-G表達後肺癌細胞的增殖加快，克隆形成能力增強。隨後分析RIG-G過表達A549穩轉細胞株的mRNA 表達譜，發現多條增殖信號通路，包括wnt信號通路和NFkB信號通路等被RIG-G顯著抑制。RIG-G過表達後，c-jun，JNK，Akt, ERK1/2等與細胞增殖相關蛋白激酶的磷酸化被顯著抑制，細胞周期蛋白c-Myc，cyclinD1表達降低，p21，p27和p53蛋白表達上調。結果還發現RIG-G 蛋白過表達後，與c-jun 蛋白結合的c-Myc DNA顯著減少。同時Luciferase的結果發現c-Myc的轉錄活性也顯著下降。表明RIG-G 蛋白可能通過降低c-jun磷酸化，從而抑制c-Myc 基因的轉錄。進一步，RIG-G過表達後，肺癌細胞中CSN 複合物CSN3，CSN5和CSN8的含量顯著下降，Rig-G 損害了CSN複合物的穩定，抑制CRL-E3 泛素連線酶多個亞基的表達。提示細胞周期抑制蛋白p27蛋白在細胞內的累積，可能是由於RIG-G 蛋白通過影響CSN 複合物的完整和穩定性，干擾CRL-E3 泛素連線酶的穩定和功能，導致p27 蛋白在細胞核內的泛素化受到抑制所引起。我們還發現，RIG-G可能通過影響STAT3-NFkB信號途徑抑制肺癌細胞的生長。RIG-G顯著抑制肺癌細胞IkBa 的泛素化降解，直接導致NFkB活性的抑制。進一步的研究表明，RIG-G明顯降低STAT3的表達，繼而抑制miR21 和 miR181b-1激活NFkB的兩個途徑PTEN/Akt 和CYLD/IkBa的活性，最終通過抑制NFkB活性，降低肺癌細胞的生長。我們的研究揭示了RIG-G抑制肺癌的作用和分子機制，為肺癌的治療提供一個新方法。