新基因NOK在肺癌增殖與轉移過程中的作用與機制研究

《新基因NOK在肺癌增殖與轉移過程中的作用與機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由李小飛擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：新基因NOK在肺癌增殖與轉移過程中的作用與機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：李小飛
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

肺癌的發病率和死亡率位居所有惡性腫瘤之首。NOK基因是新近發現的一個候選癌基因，其表達與乳腺癌和肺癌相關。我們的初步研究表明，NOK與肺癌的分期、分化程度及預後密切相關。本課題通過進一步分析NOK基因表達與肺癌分期、分型、預後的關係，探討其作為肺癌診斷與預後判定的依據，通過體外上調和阻斷NOK基因的表達，分析其促進肺癌細胞增殖與轉移的作用，探討其激活的上下游信號通路，從而證實NOK基因是肺癌發生髮展的重要癌基因之一，並闡明NOK基因促進肺癌增殖和轉移的作用機制，這對肺癌乃至相關腫瘤的臨床診治將有重要意義。

結題摘要

受體型酪氨酸蛋白激酶（RPTKs）在調節細胞遷移、增殖、凋亡等一系列過程中發揮著重要作用。劉力報導了一個新的RPTK分子並命名為NOK，該分子能夠誘導腫瘤的發生及轉移。但NOK在非小細胞肺癌（NSCLC）發病中的作用及機制尚不明了。本課題的研究目的是探究NOK在NSCLC發生髮展中的作用及其機制。 首先，用免疫組化法檢測了155例非小細胞肺癌組織中NOK蛋白的表達。結果顯示，NOK的陽性表達主要位於胞質內。NOK在NSCLC癌及癌旁組織中總的陽性率分別為68.39%、12.9%(p=0.000)；在鱗癌和腺癌中的陽性率分別為63.95%、73.91%(p=0.09)；高中低分化鱗癌中NOK的陽性率分別為29.03%、82.61%和88.89% (p=0.000)，高中低分化腺癌組織中NOK的陽性率分別為0.0%，68.29%和100% (p=0.000)；在肺鱗、腺癌TNM分期中也存在差異。以上結果表明NOK在NSCLC組織中存在高表達，表達的高低與病理分級、TNM分期相關。接著，用電穿孔法將含NOK全長基因的重組真核表達質粒轉染入肺腺癌細胞株A549及SPC-A-1中。穩定篩選出的單克隆細胞株，用RT-PCR和Western blot法進行驗證。通過流式細胞術檢測細胞周期、凋亡，結果顯示轉染後的細胞中S期細胞增多，細胞增殖指數升高，細胞凋亡比例減少；MTT法繪製細胞生長曲線，轉染後的細胞較對照組細胞生長曲線上移；劃痕試驗、細胞Transwell遷移試驗檢測轉染前後細胞的遷移能力，轉染後的細胞遷移速度加快；Transwell遷移試驗中轉染後的細胞穿膜細胞數較照組增多；細胞Matrigel侵襲試驗檢測細胞侵襲能力，轉染組的穿膜細胞數較對照組增多。以上實驗證明，NOK可提高肺癌細胞增殖、遷移和侵襲的能力並抑制其凋亡，可能在肺癌的發病中發揮重要作用。另外，用免疫組織化學法檢測了155例NSCLC患者腫瘤組織中EGFR和NOK的表達，結果顯示EGFR和NOK在總的NSCLC及其組織分類的鱗癌、腺癌中表達率和陽性強度存在相關性，相關係數分別為0.742, 0.722, 0.756。雷射共定位實驗顯示NOK和EGFR在肺癌組織和細胞中存在共定位現象。這些結果說明NOK和EGFR可能在NSCLC的發生髮展中存在共同或相互協調作用。