《ARHGAP24基因在肺癌侵襲和轉移中的作用及機制研究》是依託上海交通大學，由王磊擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ARHGAP24基因在肺癌侵襲和轉移中的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：王磊
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肺癌是世界範圍內最常見的惡性腫瘤之一，每年新發病例和死亡病例都超過100 萬。中國人群90%的不吸菸和65%的吸菸肺腺癌患者腫瘤有EGFR,HER2,ALK,KRAS,ROS1 或RET 基因突變中的一種,這些突變都有對應的靶向藥物，部分已經在臨床上取得很好的療效。但肺腺癌總體上有35%-50%的病例沒有已知的致癌基因改變，肺鱗癌已知的致癌基因改變相對更少，這部分患者目前沒有機會接受靶向治療。在前期研究中，我們發現抑癌基因ARHGA24在肺癌組織中表達明顯降低，ARHGA24基因抑制有望作為新的致癌基因改變並成為新的治療靶點。本課題以高通量測序和生物信息學篩選為基礎，通過臨床樣本驗證和分析確定肺癌的候選抑癌基因ARHGAP24，並將在體外實驗和體內實驗兩個層面上探討ARHGAP24基因在肺癌發生和發展、侵襲、轉移等生物學行為中的作用及相關機制。
結題摘要
酶激活蛋白家族在多種腫瘤的發生髮展中起重要作用，但其生物學功能及作用機制仍不明確。通過實時定量PCR、免疫組織化學或免疫印跡法檢測RhoGTP 酶激活蛋白24（ARHGAP24）、MMP9, VEGF, b-catenin，WWP2, p27, p-STAT6 和STAT6的在肺癌中的表達及 RhoA 和Rac1的活性；通過體外損傷修複試驗檢測-catenin抑制劑作用後，ARHGAP24在A549及NCI-H1975細胞調節肺癌細胞遷移及浸潤的機制；通過流式細胞術進行細胞增殖、調往及細胞周期研究；通過裸鼠試驗檢測肺癌腫瘤細胞生長狀態；通過免疫共沉澱及泛素化檢測 WWP2和p27的聯繫。研究發現ARHGAP24在肺癌組織中表達下調，ARHGAP24過表達抑制肺癌細胞增殖。體外損傷修複試驗顯示pLVX-Puro-ARHGAP24的轉染相較空白載體降低了遷移能力。ARHGAP24 過表達抑制了A549細胞中MMP9, VEGF and -catenin的表達。NCI-H1975 轉染pLKO.1-ARHGAP24-shRNA相較pLKO.1-scramble shRNA顯著降低了ARHGAP24 mRNA 及蛋白表達。-catenin 抑制劑XAV-939處理的轉染了pLKO.1-scramble shRNA 的NCI-H1975 細胞相較未用抑制劑組被顯著抑制了遷移。ARHGAP24過表達在G0-G1期誘導細胞周期阻滯，A549和NCI-H460細胞凋亡。A549和NCI-H460細胞中ARHGAP24過表達明顯抑制了STAT6信號的激活。pLVX-Puro-ARHGAP24或空白pLVX-Puro載體轉導的A549細胞後皮下注射入裸鼠體內，ARHGAP24過表達抑制裸鼠腫瘤生長。ARHGAP24敲低通過激活STAT6信號通路促進NCI-H1975細胞的增殖和WWP2的表達。上調WWP2可促進細胞增殖，抑制G0-G1期細胞周期阻滯和P27的表達。過表達WWP2後，P27的mRNA水平並沒有發生變化，而WWP2過表達顯著促進了A549細胞中P27的泛素化。綜上所述，ARHGAP24通過STAT6-WWP2-P27軸調控肺癌細胞增殖、凋亡和細胞周期進展，ARHGAP24沉默通過激活β-catenin信號通路促進肺癌細胞遷移和侵襲。
