《PI3K-Akt-mTORC2局部通路在血小板活化中的調控作用及機制探討》是依託復旦大學，由羅心平擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：PI3K-Akt-mTORC2局部通路在血小板活化中的調控作用及機制探討
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：羅心平
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
血小板活化是動脈血栓形成關鍵步驟，其內部一系列的信號轉導調控機制參與活化過程。已明確血小板的跨膜信號PI3K/Akt通路在血小板活化中有重要作用。最新研究表明PI3K/Akt下遊絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶PIKK家族mTORC1複合物通過S6K1調控Rac1的活性介導膠原引起的血小板活化，但是PI3K/Akt下游另一mTORC2複合物在血小板活化和血栓形成中的作用尚無任何研究。我們的前期工作發現人和小鼠血小板中都高表達mTORC2複合物的關鍵組成分子Rictor和SIN1，而且受mTORC2複合物調控的Akt Ser473磷酸化與血小板活化呈正相關。因而，我們推斷PI3K-Akt-mTORC2通路在血小板活化過程中發揮重要功能。本項目將圍繞這一發現，利用血小板特異基因敲除小鼠和小分子抑制劑對PI3K-Akt-mTORC2通路在血小板活化中的作用及其機制展開研究；對闡明動脈血栓機制有重要意義。
結題摘要
本課題按基金任務書要求系統研究了PI3K-Akt-mTORC2通路對血小板的活化作用及探討機制。在課題研究中我們採用了3種主要的動物模型及2種細胞模型：1.3種動物模型為血小板特異 PDK1、Sin1和 PTEN 基因敲除小鼠。通過在體研究三種小鼠頸動脈血栓模型及體外血小板聚集、鋪展、栓塊收縮等血小板活化指標，探討PI3K-Akt-mTORC2通路在血小板活化中的作用。2.2種細胞模型為高表達整合素αIIbβ3及ERK5的中國倉鼠細胞及人腎臟細胞系。利用該細胞模型及MAPK其它特異性抑制劑研究MAPK通路與PI3K-Akt通路的相互調節機制。課題的主要結果為：1、PTEN基因敲除顯著促進Akt Ser473位點磷酸化，並促進血小板分泌、聚集，該作用部分被PI3K抑制劑所抑制；2、PDK1基因敲除主要影響Akt Thr308位點磷酸化，進而影響Gsk3β Ser9磷酸化水平，PDK1基因敲除後血小板活性減弱，頸動脈血栓形成時間延長；3、MAPK激酶抑制劑對血小板的聚集均有較明顯的抑制作用，並對Akt Ser473及Thr308位點呈現濃度依賴性抑制作用。其中，ERK5抑制劑對栓塊收縮、血小板鋪展均有較顯著的影響，我們通過在CHO及293T細胞系中高表達ERK5，採用免疫共沉澱及質譜分析的方法，發現ERK5可通過與CKII結合，調節PTEN Ser370磷酸化水平，進一步影響到Akt磷酸化水平，從而調節血小板活性。4、mTORC2複合物成分Sin1的敲除可影響到血小板的聚集，鋪展，其作用機制及在體血栓及心梗模型尚需進一步研究總結。課題研究證明：PI3K-Akt-mTORC2通路在血小板活化中扮演重要角色，PTEN通過將磷酯醯肌醇3(PtdIns(3,4,5)P3)去磷酸化，負向調控該通路；ERK5可下調PTEN活性，促進該通路激活。針對該通路關鍵激酶的調控有望為將來抗栓研究提供新的靶點。課題調整情況：由於時間限制，針對血小板特異Sin1基因敲除小鼠模型的工作尚需進一步研究總結。課題已培養博士研究生2名、碩士研究生1名。公開發表論文2篇（其中SCI1篇）,待發表論文3篇，其它的結果在進一步整理中。在此基礎上，課題組新申請到2016年上海市科委項目一項，編號為16411965600。
