《Notch4信號在免疫性冠狀動脈損傷和修復中的作用及機制》是依託浙江大學，由龔方戚擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Notch4信號在免疫性冠狀動脈損傷和修復中的作用及機制
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：龔方戚
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
我們前期研究發現，川崎病時存在明顯的血管內皮損傷和功能的異常，炎症介質可能影響血管內皮祖細胞的分化行為而影響川崎病冠狀動脈損傷和修復。生理條件下，Notch4信號在調控血管內皮祖細胞的分化發育中起關鍵作用，但在川崎病冠狀動脈損傷中，Notch4信號是否調控血管內皮祖細胞損傷尚不清楚。我們通過建立免疫性冠狀動脈損傷小鼠模型，研究血管內皮祖細胞損傷的發生；並觀察不同時間冠狀動脈內皮細胞Notch4信號的表達特點，研究Notch4信號活化的時空特性；取血管內皮祖細胞培養，觀察血管內皮祖細胞的增殖分化，且予細胞轉染RNAi技術抑制Notch4基因，研究Notch4信號對血管內皮祖細胞增殖分化的調控作用；此外對免疫性冠狀動脈損傷小鼠予γ-分泌酶抑制劑干預，探討抑制Notch4信號活化是否能改善冠狀動脈血管內皮細胞損傷,從細胞分化角度進一步闡明血管內皮祖細胞對損傷血管內皮的修復機制。
結題摘要
川崎病已成為兒童最常見的獲得性心臟疾病之一，但其發病機制尚不明確。本項目研究內皮祖細胞Notch4信號通路在免疫性冠狀動脈損傷修復過程中的調控作用及機制。 第一部分：循環內皮祖細胞Notch4信號通路在免疫性冠狀動脈損傷和修復中作用及機制研究發現：早期外周血EPCs的含量及其表面Notch4表達量顯著增高，隨後降低。14天、28天實驗組胸主動脈P-selectin和RBP-JK mRNA表達水平顯著高於對照組，P-selectin與RBP-JK，Notch4與VCAM-1有相關性。3天組Notch4 mRNA表達量實驗組明顯低於對照組，7天實驗組心肌VCAM-1、P-selectin和RBP-JK mRNA表達量明顯高於對照組，14天VCAM-1 mRNA表達減少且低於對照組，而P-selcctin和RBP-JK mRNA仍高於對照組，28天回落略低於對照組。相關性分析發現P-selectin與RBP-JK呈正相關，而VCAM-1與P-selectin、RBP-JK呈負相關。VCAM-1除7天外，各時間點表達均不同程度升高，其中以3天組升高最為明顯。胸主動脈中段實驗組3、7天VCAM-1表達高於對照組。P-selectin表達實驗組冠脈起始部14天、28天表達高於對照組，胸主動脈中段14天時強於對照組，余各時間點無明顯差異。 第二部分：骨髓內皮祖細胞Notch4信號通路在免疫性冠狀動脈損傷和修復中作用及機制研究發現：LCWE處理組的骨髓EPCs含量明顯降低，但Notch4(+) EPCs的含量明顯增高。EPCs增殖活力、細胞粘附能力、細胞遷移能力、血管形成能力明顯降低，吞噬DiI-acLDL及結合FITC-UEA-I雙陽性的百分比明顯降低。早期RBP-Jκ和VEGFR-2陽性表達率降低。體外培養的骨髓EPCs NOTCH4 mRNA表達在LCWE處理3d組明顯低於對照組。RBP-Jκ mRNA表達在LCWE處理3d、7d組明顯低於對照組。P-Selectin mRNA表達在LCWE處理3d組明顯低於對照組。骨髓EPCs RBP-Jκ蛋白表達在LCWE處理3d組明顯低於對照組。VRGFR-2蛋白表達各LCWE處理組與對照組無差異。 結論： 提示內皮祖細胞Notch4信號通路通過影響EPCs功能參與了免疫性冠狀動脈損傷和修復，為進一步明確川崎病發病機制及探索新的治療方
