《HDAC3調控炎症小體在缺血性腦損傷中的意義及其機制研究》是依託南京大學，由張梅娟擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：HDAC3調控炎症小體在缺血性腦損傷中的意義及其機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張梅娟
- 依託單位：南京大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
炎症反應參與缺血性腦損傷的整個病理過程，是影響腦卒中預後的主要因素之一。炎症小體是炎症產生的起始環節。它是一種多蛋白複合體，調控caspase-1所介導的1L-1β和IL-18的產生和成熟。HDAC3是組蛋白去乙醯化酶（Histone deacetylases, HDACs）的一個亞型，能夠調控炎症小體的成分蛋白的表達，同時慢病毒包裝的HDAC3干擾質粒能降低卒中小鼠的梗死面積。我們將採用慢病毒包裝的HDAC3干擾質粒, 選擇性HDAC3抑制劑RGFP966以及HDAC3基因敲除小鼠，系統地在體內外腦缺血模型上，以及臨床角度：（1）明確炎症小體在缺血性腦損傷發生和發展中的病理意義；（2）證明抑制HDAC3調節卒中後炎症小體保護缺血性腦損傷；（3）探討HDAC3調節炎症小體的相關分子機制是否與p65的乙醯化有關，並進一步使用蛋白組學的方法尋找更多的作用靶點，為臨床治療的新思路提供依據。
結題摘要
HDAC3在小膠質細胞中調控炎症反應的功能目前尚未見報導。在本篇研究中，我們使用了HDAC3選擇性抑制劑RGFP966, 在小膠質細胞中進行了蛋白組學研究。我們篩選了近2000個蛋白，在LPS刺激後上升而加入RGFP966出現下降的蛋白有168個。進一步使用KEGG分析，發現這些改變的蛋白主要集中於Toll樣受體（Toll like receptor，TLR）。基於此分析的結果，我們驗證了TLR2, TLR3, TLR6, MAPK p38，CD36和脾臟酪氨酸激酶（spleen tyrosine kinase，SYK）的mRNA和蛋白水平。發現LPS刺激後這些分子的表達水平明顯增高，而HDAC3可以降低這些分子的表達。進一步研究發現RGFP966可以抑制STAT3和STAT5的磷酸化水平，使得TNF-α和IL-6的水平下降。同時研究發現RGFP966可以抑制小膠質細胞的激活。因此我們認為RGFP966可以抑制STAT3/STAT5通路和Toll受體通路，從而抑制小膠質細胞的激活，為HDAC3的抗炎功能研究提供更多的思路。小膠質細胞激活是缺血性腦卒中後重要的病理機制。我們又進一步研究了HDAC3對缺血性卒中後的小膠質細胞的影響以及可能的機制。炎症小體的激活是普遍存在而且目前仍然研究較少。在本篇研究中我們重點報導了HDAC3在原代小膠質細胞和卒中模型中的炎症小體的激活情況。我們首先發現HDAC3廣泛存在於小腦，側腦室，海馬和小腦部位，且在腦缺血後小膠質細胞誘導表達HDAC3。腹腔注射RGFP966明顯減低梗死面積和改善卒中小鼠的行為學改變。其次, 黑色素瘤缺失基因2 (absent in melanoma 2, AIM2)炎症小體存在於小膠質細胞和星形膠質細胞中，它受到RGFP966的調控，這種調控作用在體內腦卒中模型中也得到了證實。AIM2基因敲除小鼠與野生型小鼠相比，梗死面積在兩天時明顯減小。同時AIM2基因敲除小鼠血清中IL-18的水平也明顯降低。臨床病人數據研究發現，血清IL-18的水平與臨床卒中病人入院時的嚴重程度評分NIHSS評分密切相關。我們認為RGFP966減輕卒中後的炎症反應可能通過STAT1/AIM2/IL-18信號通路。通過本篇一系列體內和體外的研究，我們認為HDAC3抑制劑調控體內外小膠質細胞激活保護缺血性腦損傷。
