《Annexin A2在缺血性腦損傷後血管再生中的作用及機制研究》是依託浙江大學，由黃育文擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Annexin A2在缺血性腦損傷後血管再生中的作用及機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：黃育文
- 項目類別：青年科學基金項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Annexin A2是Ca2+介導的具有高親和力的磷脂結合蛋白，近年來發現其在腫瘤等細胞上具有促血管生成等作用，但其在缺血性腦損傷中的作用還不清楚。我們前期發現重組annexin A2能保護缺血性腦損傷，而敲除annexin A2基因加重缺血性腦損傷。進一步發現annexin A2主要表達在梗死周邊區的血管內皮細胞上，而抑制annexin A2的表達後，血管生成能力下降，但其機制還有待進一步研究。在本研究中，我們擬採用annexin A2基因敲除小鼠和siRNA干擾等技術，從整體、細胞角度闡述annexin A2對腦缺血損傷後的影響，重點觀察annexin A2促血管再生的作用和機制。本項目的完成，首先有助於明確annexin A2在腦缺血後血管再生的作用及機制；其次有助於利用重組annexin A2或調節相關信號通路來治療缺血性腦損傷，為相關藥物的開發和研究提供借鑑經驗。
結題摘要
Annexin A2是Ca2+介導的具有高親和力的磷脂結合蛋白，近年來發現其在腫瘤等細胞上具有促血管生成等作用，但其在缺血性腦損傷中的作用還不清楚。我們在野生鼠和A2-/-小鼠胚胎期15.5天，10 kDa的示蹤劑已經聚集於腦血管中，並沒有滲漏現象。而對於550 Da的小分子示蹤劑，可以發現在A2-/-小鼠胚胎期15.5天，該小分子示蹤劑存在滲漏，而野生鼠卻沒有滲漏。而在12周的野生型小鼠和A2-/-小鼠的腦組織中，也觀察到了同樣的現象。以上的實驗結果均提示膜聯蛋白A2參與血腦屏障功能形成和成熟。進一步提取三個月大的野生型小鼠和A2-/-小鼠的腦微血管內皮細胞，並分析連線複合體的表達水平。發現與野生型小鼠比較，緊密連線蛋白： ZO-1、Claudin-5，、粘附連線蛋白VE-cadherin的表達在A2-/-小鼠腦微血管中明顯降低。以上實驗證明膜聯蛋白A2的缺失會造成血腦屏障功能失調。 使用小干擾RNA（siRNA）將人腦微血管內皮細胞（HBMEC）中膜聯蛋白A2表達沉默，我們發現細胞間的滲透性顯著高於對照組。在單層緊密的HBMEC中加入炎症分子白介素-1β （IL-1β），細胞的滲透性顯著增加，而rA2可以逆轉這種損傷。進一步，IL-1β+缺氧混合模型能明顯增加HBMEC的滲透性，而rA2也能逆轉這種損傷。 。提取HBMEC的細胞膜蛋白，並對連線複合體的表達進行了檢測。IL-1β+缺氧能降低所有連線複合體蛋白的表達，而給予rA2後，能顯著增加ZO-1和VE-cadherin在細胞膜上的表達。以上實驗表明，rA2通過影響ZO-1和VE-cadherin的表達以及在細胞中的分布來保護IL-1β+缺氧造成的血管內皮細胞滲透增加。進一步提取了人腦微血管內皮細胞的膜蛋白，使用膜聯蛋白A2的特異性單克隆抗體進行免疫共沉澱（Co-IP）。結果顯示膜聯蛋白A2能夠和細胞膜上粘附連線蛋白VE-cadherin以及細胞骨架蛋白F-actin相互結合。IL-1β+缺氧能夠減少膜聯蛋白A2在HBMEC胞膜上的分布，而給予rA2後，膜上A2的量明顯增加。 。這也導致A2和VE-cadherin、F-actin的相互作用增加，進而穩定VE-cadherin 和F-actin在血管內皮細胞膜上的分布，增加細胞的緊密連線性。
