《microRNA-210在小鼠缺血性腦損傷修復中的作用及機制研究》是依託上海交通大學，由曾麗莉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA-210在小鼠缺血性腦損傷修復中的作用及機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：曾麗莉
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
缺血性腦卒中缺乏有效治療手段，microRNAs (miR)分子量小且作用靶點多是目前治療腦缺血損傷的新途徑。我們對急性缺血性腦卒中患者外周血miR表達譜的高通量篩選及擴大樣本驗證結果提示：miR-210與腦缺血發生髮展密切相關，是調控缺血性腦損傷修復的關鍵miR，miR-210外周血含量高則患者長期預後好。然而，miR-210在腦缺血損傷修復過程中的作用機制尚不清楚。本課題將建立小鼠局部腦缺血模型，採用慢病毒過表達miR-210和反義核苷酸抑制miR-210技術，探索（1）過表達miR-210能否減小缺血小鼠腦梗死體積並改善動物行為學；（2）miR-210的治療作用是否與促進局部血管新生及神經再生相關；（3）miR-210是否是通過下游靶基因BDNF及其受體蛋白TrkB調控腦缺血區血管新生及神經再生。上述研究有助於進一步闡明腦缺血損傷病生機制，也可能為缺血性腦卒中提供潛在治療新靶點。
結題摘要
近年來，血管新生和神經再生修復治療腦缺血逐漸受到學者們的重視,尋求優良的促血管神經再生靶點是開展該治療方式研究的重要基礎。先期人們一度將目光投向於各種蛋白水平的分子，但近年來隨著小RNA領域的發現，其分子量小以及靶位點多的優勢，在某種程度上作為治療靶位點可能優於蛋白水平分子。在先前的研究中，我們發現miR-210與腦缺血發生髮展密切相關。但其對正常和缺血腦組織的作用及機制尚不清楚？miR-210能否在缺血缺氧條件下通過調控BDNF蛋白表達促血管和神經再生？如有促血管和神經再生，是否能減輕腦梗死面積並改善腦缺血小鼠長期預後？我們首先研究發現過表達mir-210能增加正常小鼠腦組織的血管新生和神經再生，主要通過調節VEGF的表達。為進一步明確miR-210對缺血腦損傷及修復的作用及機制，我們建立局部大腦中動脈栓塞再灌注小鼠動物模型，模擬人體腦缺血病理狀態，利用慢病毒載體技術過表達miR-210（LV-210），採用立體定位技術對左側腦基底節區缺血半暗帶區注射病毒，觀察缺血後28天注射側血管新生和神經再生情況，並採用神經功能評分及神經行為學測定最終評價其長期治療作用。結果發現，腦缺血後小鼠的神經功能評分增高；轉角實驗中轉向左側次數多；轉棒實驗中轉棒停留時間縮短，提示腦缺血對小鼠神經功能的損傷以及動物行為學的影響。而隨著時間推移，腦缺血小鼠神經功能評分逐漸下降，轉角時向左轉次數減少，轉棒停留時間也逐漸延長，提示缺血腦組織損傷隨著時間推移逐漸呈修復趨勢，符合缺血性腦卒中發生髮展的病理過程。而LV-210組與LV-GFP對照組相比，發現過表達miR-210在缺血後28天能明顯改善腦缺血小鼠的各項動物行為學觀察指標。同時，腦缺血後28天LV-210組較LV-GFP組Brdu陽性細胞、CD31陽性血管以及Brdu/CD31共染陽性細胞增多，表明LV-210對缺血半暗帶的促血管新生作用；LV-210組DCX陽性細胞較LV-GFP組增多，且向缺血半暗帶區移行多，提示促神經再生作用；LV-210組Western Blot定量腦缺血後28天缺血半暗帶區mBDNF/ProBDNF比例較LV-GFP組增高，提示腦缺血體內過表達miR-210可能通過調節腦內BDNF成熟體與前體的比值促血管和神經再生，並通過螢光素酶報告基因檢測系統驗證了BDNF為mir-210直接靶基因，為腦缺血治療提供新的作用
