基本介紹
- 中文名:DNA印跡雜交
- 定義:進行基因組DNA特定序列定位的通用方法
DNA印跡雜交,是指進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。1975年由英國人薩瑟恩創建。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNA片段,將膠上的DNA變性並在原位將單鏈DNA片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上...
印跡雜交,是基因診斷技術的一種,有多種方式,第一種是Northern印跡雜交,是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法。第二種是Southern印跡雜交,是由凝膠電離經限制性內切酶消化的DNA片段。第三種是Western印跡雜交,是將...
Southern印跡雜交(Southern blot)是1975年由英國人southern創建,是研究DNA圖譜的基本技術,在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值。基本概念 Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。其基本原理是:具有...
雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同又被分為DNA印跡雜交(Southern blot hybridization )和RNA印跡雜交(Northern blot hybridization)。步驟 (1)製備樣品:首先需要從待檢測組織樣品提取DNA或RNA。DN...
Southern印跡法(Southern Blot)是將基因組 DNA經限制性內切酶酶解、瓊脂糖凝膠電泳分離,使DNA片段按分子量大小排列在瓊脂糖凝膠上。經鹼處理凝膠使DNA變性(使雙鏈DNA變成單鏈),通過具有一定鹽離子濃度溶液的毛細管作用,將凝膠中變性的單...
膜上的DNA被固定後與核酸探針(DNA或RNA)雜交。同位素探針通過放射自顯影顯示結果,螢光探針雜交的結果以螢光顯示。這一極為靈敏和有效的核酸雜交技術是以它的發明人索森(E.M.Southern)的姓命名的。簡介 高分子量DNA用限制性內切酶消化後...
Northern印跡雜交(Northern blot)。這是一種將RNA從瓊脂糖凝膠中轉印到硝酸纖維素膜上的方法。DNA印跡技術由Southern於1975年創建,稱為Southern印跡技術,RNA印跡技術正好與DNA相對應,故被稱為Northern印跡雜交,與此原理相似的蛋白質印跡...
DNA 印跡法是2019年公布的結核病學名詞。定義 將經過凝膠電泳分離的DNA轉移到適當的膜(如硝酸纖維素膜、尼龍膜等)上的技術。可以採用毛細管作用或電泳法轉移,轉移到膜上的DNA再與標記的特異核酸探針雜交等進行分析。出處 《結核病學...
southern印跡的步驟 1從組織中提取DNA 2用特定的核酸內切酶酶切 3瓊脂糖凝膠電泳 4鹼變性 5中和反應 6轉膜 7固定 8雜交 9雜交信號檢測 northern印跡的步驟:1從細胞中提取總RNA 2甲醛凝膠變性電泳 3轉膜 4固定 5雜交 6雜交信號檢測 ...
有人曾用此法從10⁵個培養細胞中檢測到至少5pg的Epstein-Barr病毒DNA。完整細胞斑點印跡法可以用於篩選大量標本,因為它使細胞直接在膜上溶解,所以DNA含量甚至比常用的提取法還高,又不影響與32P標記的探針雜交,但它不適用於非放射性...
DNA印跡技術由Southern於1975年創建,稱為Southern印跡技術。RNA印跡技術正好與DNA相對應,故被稱為Northern印跡雜交,與此原理相似的蛋白質印跡技術則被稱為westernblotting。Northern印跡雜交的RNA吸印與Southern印跡雜交的DNA吸印方法類似,...
反轉錄得到的產物RNA/DNA雜交雙鏈經鹼變性後,RNA單鏈可被迅速地降解成小片段,經Sephadex G-50柱層析即可得到單鏈探針。 材料:已提純的RNA或mRNA 設備:高速台式離心機,恆溫水浴鍋等。試劑:(1)合適的引物:隨機引物或oligo(dT)15-...
課題將在均相DNA雜交電化學信息識別轉換、均相DNA雜交電化學信號放大以及多目標均相DNA雜交電化學檢測等方面進行系統研究並取得突破。研究將通過主客體分子識別技術、分子印跡技術、自組裝技術和電化學活性DNA分子信標等實現溶液中均相DNA 雜交...
膜雜交法是常用的分子雜交法。分子雜交就是套用特異性探針在複雜的待檢DNA中,依據鹼基互補配對原理來鑑定其同源DNA分子的過程。其中Southerm印跡雜交是一種套用極為廣泛的經典的DNA雜交方法,Southem印跡法用於遺傳病的基因診斷可以直接檢測...
染色體印跡法是一種研究染色體DNA上某些基因位置的方法。先用適當的方法(如脈衝場電泳)分離染色體DNA,轉移印跡到雜交膜上,再用待研究的基因探針雜交。印跡也是一種表觀遺傳學機制,是指在不改變基因編碼的情況下,細胞內某分子發生的、...
RNA印跡(Northern blot)是2014年公布的藥學名詞。定義 DNA印跡雜交技術的一種改變的方法,其中RNA片段經電泳分離後轉移至一特殊的紙上,並共價結合其上,然後同與之互補的放射性RNA或單鏈DNA探針進行雜交定位。出處 《藥學名詞》第二版...
二、DNA的復性 25 三、核酸雜交在醫學中的套用簡介27 參考文獻27 第二章核酸分子雜交的類型28 第一節固相核酸分子雜交類型28 一、菌落原位雜交(colony in situ hybridization)28 二、斑點雜交(dot blot)29 三、Southern印跡雜交(...
通過接觸吸附的方式,將DNA、RNA或蛋白質等大分子從一種介質轉移至另一種介質的過程。例如,Southern印跡、Northern印跡、Western印跡即分別為將DNA、RNA、蛋白質從凝膠轉移至硝酸纖維素膜或尼龍膜上。以待測物為探針與印跡過的膜雜交後...
原位雜交技術包括有:菌落原位雜交(colony in situ hybridization)、斑點雜交法(Dot blot)、Southern印跡雜交(Southern blot)、Northern印跡雜交(Northern blot)、組織原位雜交(Tissue in situ hybridization)和基因組原位雜交(Genome ...
1.核酸分子雜交技術 套用該技術可對特定DNA或RNA序列進行定性或定量檢測,包括Southern印跡雜交、Northern印跡雜交、點雜交、原位雜交等。(1)Southern印跡雜交:Southern印跡雜交是一種利用硝酸纖維素膜或尼龍膜吸附DNA的功能進行雜交的技術...
1.3 常用核酸分子雜交技術: ① Southern印跡雜交;② Northern印跡雜交;③斑點雜交(dot blotting);④原位雜交(in-situ hybridization);⑤夾心雜交(三明治雜交);⑥液相雜交。恆溫擴增 恆溫擴增技術主要包括鏈置換擴增法( strand ...
帶有樣品的膜就可以用與目標序列互補的標記的DNA標記探針來探測。最初的操作手冊大都採用放射性標記,但現在非放射性標記已開始被採用。自從PCR技術被用於檢測特定DNA序列後,Southern印跡法在實驗室中的套用大為減少。但此方法依然有著其他...
由於核酸分子的高度特異性及檢測方法的靈敏性,綜合凝膠電泳和核酸內切限制酶分析的結果,便可繪製出DNA分子的限制圖譜。Southern印跡雜交(Southern blot)是研究DNA圖譜的基本技術,在遺傳病診斷、DNA圖譜分析及PCR產物分析等方面有重要價值...
其原理是核酸變性和復性理論。即雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開,而在條件恢復後又可依鹼基配對規律形成雙鏈結構。雜交通常在一支持膜上進行,因此又稱為核酸印跡雜交。根據檢測樣品的不同,核算雜交又被分為DNA印跡雜交(...
RFLP標記是由於不同基因型之中內切酶位點的鹼基插入、缺失、重組或突變,利用限制內切酶消化基因組DNA時,會產生大小不同的DNA片段,電泳後通過Southem印跡雜交,將這些大小不同的DNA片段轉移到硝酸纖維膜或尼龍膜上,然後用特異的探針進行...
基因晶片技術由於同時將大量探針固定於支持物上,所以可以一次性對樣品大量序列進行檢測和分析,從而解決了傳統核酸印跡雜交(Southern Blotting 和 Northern Blotting 等)技術操作繁雜、自動化程度低、操作序列數量少、檢測效率低等不足。而且...
1、DNA和RNA的提取:人體組織細胞在含有SDS的溶液中,用蛋白酶K消化分解蛋白質,然後用酚和氯仿抽提,用乙醇沉澱DNA。也可用離子交換樹脂快速提取DNA。2、Southern印跡雜交分析:這是一種常用的DNA分子遺傳學研究技術,由英國科學家Southem...
RFLP反映了常見的個體間DNA核苷酸的可遺傳性變異,它按照孟德爾方式遺傳。RFLP可用Southern印跡雜交法檢出。用Southern雜交檢出RFLP時,如探針跨越切點,則被切開的兩個片段均可與探針雜交,從而顯示兩條雜交帶。2.兩點RFLP (1)點多態(...
用來探測DNA的已知互補片段稱為DNA探針,通常是套用已預先經放射性標記或非放射性標記的DNA單鏈來識別另一核酸分子中與其同源的部分,其特異性和敏感性極高。實驗方法有印跡雜交(southern blot)、斑點雜交和原位雜交。目前分子雜交技術已...
該結果還用螢光素交換標記對照和處理組及RNA印跡方法證實。在HGP完成之後,用於檢測在不同生理、病理條件下的人類所有基因表達變化的基因組晶片為期不遠了。基因診斷 從正常人的基因組中分離出DNA與DNA晶片雜交就可以得出標準圖譜。從病人...