高分子量DNA用限制性內切酶消化後，經瓊脂糖凝膠電泳，使不同大小的DNA片段分離，並直接在膠上變性，然後利用毛細作用(現常用電轉移技術)，將它們轉移到硝酸纖維膜或尼龍纖維膜上，這一過程稱為吸印。膜上的DNA被固定後與核酸探針(DNA或RNA)雜交。同位素探針通過放射自顯影顯示結果，螢光探針雜交的結果以螢光顯示。這一極為靈敏和有效的核酸雜交技術是以它的發明人索森(E.M.Southern)的姓命名的。
基本介紹
- 中文名：索森印跡法
- 外文名：Soson blotting
- 命名：索森(E.M.Southern)的姓命名
- 電泳：經瓊脂糖凝膠電泳
- 優點：極為靈敏和有效的核酸雜交技術
- 消化：用限制性內切酶消化後
簡介,核酸分子雜交,雜交方法,
簡介
高分子量DNA用限制性內切酶消化後，經瓊脂糖凝膠電泳，使不同大小的DNA片段分離，並直接在膠上變性，然後利用毛細作用(現常用電轉移技術)，將它們轉移到硝酸纖維膜或尼龍纖維膜上，這一過程稱為吸印。膜上的DNA被固定後與核酸探針(DNA或RNA)雜交。同位素探針通過放射自顯影顯示結果，螢光探針雜交的結果以螢光顯示。這一極為靈敏和有效的核酸雜交技術是以它的發明人索森(E.M.Southern)的姓命名的。
核酸分子雜交
根據異源單鏈核酸分子間因結構互補發生共價鍵結合，能形成互補雜合雙鏈，而進行分子遺傳學研究的一種技術。雙鏈核酸分子加熱至80～100℃時，鹼基對之間的氫鍵斷開，形成兩條單鏈，這一過程叫作核酸的變性作用或解鏈。變性的核酸分子慢慢冷卻，互補的鹼基對之間又會重新形成雙鏈分子，這一過程叫作核酸的復性作用或退火。核酸分子在pH〉10和pH〈3的環境中也會變性，當條件適合時又可復性。核酸分子雜交技術是基於核酸變性與復性的原理。
利用核酸雜交技術進行定性或定量分析的最有效方法是將一種核酸單鏈用同位素或螢光物質標記，製成探針(見核酸分子探針)，再與另一種核酸單鏈雜交。
雜交方法
核酸分子雜交有液相和固相兩種方法。液相法的核酸單鏈分子都在溶液中，通過分子運動進行雜交固相法是將一種核酸單鏈固定在不溶性的介質上。另一種核酸單鏈在溶液中與固定的核酸分子進行雜交。常用的固相介質有硝酸纖維膜、尼龍纖維膜、瓊脂糖和聚丙烯醯胺凝膠等。
