基本介紹
- 中文名：B肝病毒DNA檢測
- 外文名：Hepatitis B virus DNA detection
- 目的：判斷B肝病毒複製的常用手段
- 原理：DNA的濃度越高病毒的複製越活躍
- 健康要求：HBVDNA數值應該越低越好
- 臨床意義：B肝的徹底治癒
- 領域：醫學
DNA檢測,作用,臨床意義,複製過程,第一步：黏附,第二步:脫殼,第三步：入核,第四步：轉錄,第五步：翻譯,第六步：逆轉錄,第七步：組裝,建議檢測頻率,注意事項,檢測方法,檢測報告,檢測費用,檢測要空腹嗎,B肝病毒DNA檢測的作用,
DNA檢測
DNA檢測方法由於其特異性好、靈敏度高、操作簡便等原因已成為物種鑑定的主要檢測方法。首先，DNA在細胞中含量相對穩定，比蛋白質耐熱，在產品的加工過程中也相對不容易被破壞，從加工產品中仍能提取出足夠可供分析的小片段DNA；其次，DNA信息量大，物種的差異直接反映在DNA序列的差異上。可以根據DNA上不同區域、基因、片段的進化特點選擇適合的靶基因進行檢測；第三，DNA的序列穩定，不同組織類型、年齡和狀態影響不大；第四，由於基因技術的發展，DNA檢測技術可以發現含量低至幾個拷貝的基因，使分析水平從常量水平發展到痕量水平；第五，各類高精尖儀器的研發使得檢測時間大大縮短，操作也更為便捷。自動化檢測更是有助於提高操作的精確度，防止交又污染和有害有毒物質的損害。
以往B肝患者抗病毒治療的指征是：B肝病毒e抗原陽性（大三陽）患者HBVDNA數值要求達到10的5次方拷貝/毫升（20000U/ml），B肝病毒e抗原陰性（小三陽）患者B肝病毒DNA數值要求達到10的4次方拷貝/毫升（2000U/ml），但是10的4次方拷貝/毫升以下也不能認為就沒有問題了，最新的國際研究資料表明：和肝臟疾病進展相關的病毒DNA水平域值尚不清楚，即使HBVDNA水平持續低於20000U/ml，也可能B肝病毒情仍在進一步發展，因此HBVDNA數值應該越低越好，國際建議的HBVDNA檢測正常值應該是：< 50U/ml 。
作用
B肝病毒DNA檢測在B肝檢查化驗中使用的越來越普遍，可見B肝病毒DNA檢測在B肝檢查化驗中占的分量越來越重，這是因為B肝病毒DNA檢測對確診B肝和評估B肝治療效果具有十分重要的作用。主要表現於以下七個方面：
1、了解B肝病毒在體記憶體在的數量。
2、B肝病毒是否複製。
3、B肝是否傳染，傳染性有多強。
4、是否有必要服藥。
5、肝功能異常改變是否由病毒引起。
6、判斷病人是適合用哪類抗病毒藥物。
7、判斷藥物治療的療效。
臨床意義
所以說HBV—DNA定量檢測指標降低在B肝治療中有著非常重要的意義，是B肝轉陰的前奏，也是康復最為關鍵的一步，只有體內的HBV—DNA定量指標降低，病毒的複製繁殖才會停止，B肝的徹底治癒才有希望。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義一、對醫生的診斷和用藥非常重要。通過B肝病毒DNA檢測能夠判定判斷B肝患者適合用哪類抗病毒藥物；B肝病毒DNA檢測對用藥的劑量、用藥時間、是否需要聯合用藥以及用藥的效果等提供重要的參考依據，也是臨床上評價抗病毒或免疫增強藥物療效的最客觀的指標。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義二、能夠直接反映B肝病毒複製狀態及傳染性的最佳指標，通過B肝病毒DNA的含量能直接反映病毒在體記憶體在的數量、是否傳染，傳染性有多強。但是需要說明的一點是：B肝病毒載量的多少並不代表肝臟的損傷程度，也無法判斷病情的嚴重程度。
B肝病毒DNA檢測的臨床意義三、反映病毒複製的活躍程度，間接地反映機體的免疫應答水平。
複製過程
不同於一個真正的生物體，病毒並不通過生長和分裂等方式繁殖自身，而是像鑄造機器零件一樣，按照一定的模具拷貝出來的。病毒DNA中包含有一些程式，指導病毒的遺傳物質和其它一些結構蛋白組分增殖。另外，病毒DNA中還包含有一些信息，使得單一組分能夠在細胞因子的幫助下，自發組裝成新的病毒顆粒。
在醫學上，病毒的繁殖被稱之為“複製”，在複製的過程中，有兩個很重要的因素：一個是催化劑，另一個是模板。沒有這兩個因素，B肝病毒就不能複製。B肝病毒複製的“催化劑”就是B肝病毒DNA（即HBV-DNA）聚合酶。沒有這種聚合酶的作用，B肝病毒的複製就會停止。
B肝病毒的基因組（HBV-DNA）是由兩條螺旋的DNA 鏈圍成的一個環形結構。其中一條較長負鏈已經形成完整的環狀；另一條長度較短的正鏈，呈半環狀。在感染肝細胞之後，這條半環狀的DNA鏈就會以負鏈為模板，在催化劑──HBV-DNA聚合酶的作用下延長，最終形成完整的環狀。這時的B肝病毒基因組就形成了一個完全環狀的雙股DNA。把這種DNA稱做共價閉合環狀DNA（即cccDNA），可以把它看作是病毒複製的原始模板。模板形成後，病毒基因會以其中的一條cccDNA為模板，利用肝細胞基因中的酶和DNA 聚合酶的“催化”，一段基因又一段基因地複製，形成負鏈和正鏈。最後再裝配到一起形成新的HBV-DNA顆粒。
第一步：黏附
HBV人侵人體後，依靠其外膜(表面抗原，HBsAg)能粘附在肝細胞膜上，當然，粘附的首要條件是HBsAg先要識別肝細胞膜。一旦粘附成功，HBv的外膜也就完成了它的使命，甩掉了外膜，HBV鑽進肝細胞內。
第二步:脫殼
HBV核心部分來到肝細胞內，在肝細胞漿中還要脫掉它的“核殼”(核心抗原即HBcAG及E抗原即HbEAG)，這樣，就暴露出了它最核心部分，即B肝病毒核酸(HBv DNA)，HBV大有“赤膊上陣”之意。HBV-DNA包涵著B肝病毒的全部基因，是它主宰著HBv的複製的。
第三步：入核
HBv-DNA從肝細胞漿內進入肝細胞核，在這裡它要進一步發育完善，形成了HBv的“共價閉合環狀脫氧核塘核酸”(HBv cccDNA)。這個cccDNA十分了得，它深深藏匿在肝細胞核內，而肝細胞核外面有一層堅韌的核膜，藥物都難以通過這堅韌的核膜，因而對cccDNA也無可奈何，但cccDNA卻掌控著HBv所有的遺傳信息，指令著HBv的複製。因此．現有的藥物想徹底消滅人體內的HBv真比登天還難，這些藥物只能抑制HBv的繁殖或複製，“全部轉陰”也只能是一種幻想。
第四步：轉錄
HBV在這一階段會以cccDNA為“模子”，像錄音帶似的把HBv cccDNA上的所有信息全都轉錄到“信息核糖核酸”(mRNA)上。這個轉錄過程需要人體內的酶類幫忙，因為所有的病毒都不能自己獨立生活．必須有生物的機體幫忙，才能完成這個轉錄過程。HBv也是這樣。在人體酶類的幫助下完成它的複製環節。
第五步：翻譯
在mRNA上已錄取了HBv的所有信息，然後就是“翻譯”了，其實就是開始製造病毒蛋白。MRNA通過“翻譯”過程，可將HBv的各種蛋白製造出來，如HBv的外膜蛋白(HBsAg)、核殼蛋白(HBeAg、HBcAg)、HBvDNA多聚酶等；至此，HBv的外膜有了，HBv的核殼也有了，這些東西只是零件，飄浮游離著的，還有重要的HBv最核心部分沒有“製造”山來。
第六步：逆轉錄
啥叫“逆轉錄””把HBv的遺傳信息從DNA轉錄到RNA上叫做“轉錄”，是正常的“順轉錄”；而將HBv的遺傳信息從RNA上再轉錄到DNA上，就叫做“逆轉錄”了。那么，HBv的mRNA上的遺傳信息最後就轉錄成了HBV的DNA，這時，HBv的最核心部分(即HBv DNA)也算製造完成。
第七步：組裝
從第五步和第六步的複製看來，HBv的所有零件均已製作完畢，到了第七步也就簡單了，把這些零件進行組裝，裝配妥了，HBv的複製也算大功告成了。
HBv就是這樣繁殖或複製的。看起來好像挺複雜，其實HBv複製過程是很快的．一個複製周期不到48小時。複製出的下一代HBv或侵入另外的健康的肝細胞，或被釋放到血液中去，在人們抽血化驗時也就被檢測到了。
建議檢測頻率
無論是大三陽還是小三陽的病人，發現患有B肝的時候就建議檢測HBV DNA。一般來說，病人的具體情況可能會不太一樣，如果在一個病毒的活動期，B肝病毒DNA檢測可能需要勤一些，一到兩個月就應檢測一次，如果是在病毒的耐受期，病情相對比較穩定，可以3—6個月檢測一次。在進行抗病毒治療的過程中，也是需要定期檢測HBV DNA。一般來說至少三個月要檢查一次。
注意事項
檢查注意事項：
1、 這個檢查與是否進餐沒有任何關係,所以如果你只做HBV DNA檢查,可以檢查前進餐.
2 、如果你還要做肝功能檢查，建議你在檢查前避免進，避免熬，避免酗酒,避免用藥,女性生理期避免做肝功能檢查。
對於B肝結果的認識，有這幾點注意事項：
1、關於單位的換算.最常見的單位是copies/ml,也有重量的單位,比如fg/ml,pg/ml.1 pg = 1000 fg,那么1 pg/ml = 283,000 copies/ml.
2、由於PCR的方法雖然精確度，但是誤差相對較大,而且假陽性率也比較，所以，對於每次B肝DNA檢查的結果,在兩個數量級之內的變化，通常會認為沒有變化或變化不大.而且DNA也在不斷的波動,所以不能以一次或兩次的檢查結果就簡單的判斷是否好轉，應該綜合其它結果以及DNA的變化趨勢。
3、對於B肝陰性的標準,我們一般認為是10的3次方,但不能一概而論,應該視化驗單上具體給出的參考值而定.陰性最準確的表達方式是,未檢測到,化驗單表示為<參考值copies/ml,並沒有具體的數值。
4、DNA複製程度的大小並不代表肝臟實際損害的程度,DNA複製程度高,並非就代表損害嚴重。
檢測方法
主要有：螢光定量PCR技術、競爭PCR技術、PCR酶聯免疫吸附法、螢光標記引物法和PCR酶聯化學發光法。
臨床上最先進的B肝病毒DNA檢測方法是實時螢光定量PCR方法，由於此技術要求較高，只有少數大型醫院有條件使用實時螢光定量PCR方法。
檢測報告
1、B肝病毒DNA檢測報告：主要包括定性和定量。
2、定性，即確定是陰性還是陽性。B肝病毒DNA的正常值為陰性，即B肝病毒DNA<1x10的3次方拷貝/ml
4、定量，即檢測B肝病毒在血液中的含量。定量檢測結果主要是對抗病毒治療提供檢測和療效參考。由於結果是數字的，而不是“高/低”、“陰/陽”、“正常/不正常”，所以看起來比較麻煩。確定正常值指標一定要知道所做實驗的參考範圍。參考範圍因檢測儀器、方法、試劑的不同而有差異。
5、“+”：陽性，體內病毒存在複製。對應於定量方式中HBV-DNA>1x10E3 copies/ml。
6、“－”：陰性，病毒的複製程度低於檢測限。對應於定量方式中HBV-DNA<1x10E3 copies/ml。
7、定量：HBV-DNA定量單位在報告單上通常用“copies/ml”、“拷貝數/ml”或“IV/ml”表示，表示每毫升的血清或血漿中病毒基因組的個數，該數據越大，表明病毒在人體的複製越厲害，例如“HBV-DNA=4.3x10E3 copies/ml”代表每毫升血清中有4.3乘以10的3次方，也即4300個B肝病毒。
檢測費用
B肝患者到醫院檢查確診病情或者複查時，都要進行B肝病毒DNA檢測，這一檢測項目已經成為觀察B肝病毒實際情況的最重要和最關鍵的指標，在抗病毒治療時，也需要進行B肝DNA病毒檢查。
B肝病毒DNA檢測費用受不同因素的影響而有一定差異。B肝病毒DNA檢測費用大概在100元左右。如果用進口試劑化驗定量大約需要150-200元。
B肝病毒DNA檢測系統技術要求嚴格，對肝病醫院人員，醫療技術，環境有很高的要求，只有正規，具備一定等級的大型醫院具備B肝HBV-DNA檢測系統的資格。
檢測要空腹嗎
單純檢測B肝病毒DNA時是不需要空腹的，這主要是因為B肝病毒DNA指的是B肝病毒的核心物質和病毒複製的基礎，是不受飲食、運動以及休息等因素影響的，也就是說進不進食食物是不會直接影響B肝病毒DNA檢測結果準確性的，所以說單純檢測B肝病毒DNA時是不需要特別注意空腹的。但如果在檢測B肝病毒DNA的同時需檢測肝功能、肝臟B超等則應注意空腹檢測。
B肝病毒DNA檢測的作用
B肝病毒DNA定量檢測是判斷B肝病毒複製的常用手段，其檢測意義主要有以下幾種：
1、B肝病毒DNA檢測可說明B肝病毒的複製狀況：如B肝病毒DNA測定值>1000copies/ml，常提示病毒有複製，而且拷貝數的高低與病毒複製的程度成正相關;若結果陰性，則表明病毒處於不活躍階段，病情比較平穩。
2、B肝病毒DNA檢測：判斷B肝病毒傳染性強度的重要指標：一般來說如B肝病毒DNA測定值>1000copies/ml，常提示具有傳染性，且檢測值越高就說明B肝病毒複製越活躍，傳染性越強。
3、B肝病毒DNA檢測可為臨床治療提供可靠的依據：B肝抗病毒治療的標準為B肝病毒DNA>1000copies/ml，且轉氨酶升高超過正常值兩倍以上者;對一些肝臟有進行性損害(經肝穿活檢證實)、B肝病毒dna陽性者，即使肝功能正常，必要時也應考慮抗病毒治療。
4、可評價B肝抗病毒治療效果的依據：在治療過程中應定期檢測、記錄B肝DNA的檢測結果，以作比較，觀察抗病毒療效，如抗病毒治療3個月或半年，B肝病毒DNA仍不轉陰或下降少於2次方，則提示該藥物抗病毒療效欠佳，可考慮停藥或換用其他抗病毒藥。
5、其他：B肝病毒DNA檢測結果在一定程度上可以輔助判斷B肝病毒是否產生了變異，如在治療過程中B肝病毒dna檢測結果由陰性轉為陽性時，則提示病毒已發生變異，應結合具體病情重新選擇抗病毒藥物。
