轉錄因子Klf5在成牙本質細胞分化中的作用機制

《轉錄因子Klf5在成牙本質細胞分化中的作用機制》是依託浙江大學，由陳卓擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：轉錄因子Klf5在成牙本質細胞分化中的作用機制
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：陳卓
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

研究證明Klf5在多種細胞分化的轉錄調控網路中起關鍵作用。本項目組前期研究發現Klf5在小鼠分泌期成牙本質細胞中呈現高度特異性表達，而分泌期為成牙本質細胞終末分化的關鍵時期，推測Klf5可能在成牙本質細胞分化中起調控作用。本研究擬以成牙本質細胞分化的體外模型為研究對象，重點探討：(1)觀察Klf5在成牙本質細胞分化過程中的動態表達；（2）利用基因轉染及RNAi技術，從過表達和抑制表達兩個方面探討Klf5對成牙本質細胞分化的影響，明確Klf5在成牙本質細胞分化中是否具有關鍵的調控作用；（3）利用晶片技術檢測Klf5過表達或受抑制後下游基因表達情況，篩選受Klf5調控的下游靶基因，進一步利用生物信息學技術和凝膠遷移試驗分析Klf5與下游靶基因的啟動子序列是否結合，明確Klf5與下游靶基因啟動子相結合的作用位點。本研究對進一步闡明成牙本質細胞分化的分子機制具有意義。

結題摘要

研究證明Klf5與多個關鍵靶基因結合而調控著多種細胞的分化或增殖。本項目組前期研究發現Klf5在小鼠分泌期成牙本質細胞中呈現高度特異性表達，而分泌期為成牙本質細胞終末分化的關鍵時期，推測Klf5在成牙本質細胞分化中起重要作用。本研究以小鼠牙乳頭永生化細胞系（iMDP-3）分化的體外模型為研究對象，利用Real-time PCR和Western blotting，檢測到Klf5協同成牙本質細胞分化標記物Dspp和Dmp1在成牙本質細胞樣細胞分化過程中表達上調；利用免疫螢光技術，檢測到Klf5和Dspp在小鼠磨牙的成釉細胞和成牙本質細胞，以及小鼠牙乳頭永生化細胞的細胞漿和細胞核中共表達；利用基因轉染技術，Klf5過表達可促進成牙本質細胞樣細胞分化，並上調Dspp和Dmp1的表達；利用螢光素酶報告測試篩選出Klf5對Dspp轉錄調控的關鍵片段在Dspp上游啟動子的5.6kb，對Dmp1轉錄調控的關鍵片段在Dmp1上游啟動子的2.6kb；利用凝膠遷移試驗（EMSA）和染色質免疫沉澱（CHIP）技術，檢測到Klf5與Dspp上游啟動子的5.6kb的幾個結合位點以及與Dmp1上游啟動子的2.6kb的數個結合位點均可結合。本研究表明Klf5可通過調控Dspp和Dmp1上游啟動子的轉錄結合來促進成牙本質細胞樣細胞的分化，為成牙本質細胞的分化機制提供理論基礎。