觸酶試驗

觸酶試驗（Catalase test），是關於觸酶的一個實驗做法。大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶，但鏈球菌屬陰性，故常用此試驗來鑑定。分枝桿菌的鑑別則用耐熱觸酶試驗，結核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

基本介紹

• 中文名：觸酶試驗
• 外文名：Catalase test
• 別稱：過氧化氫酶
• 注意事項：3%H2O2溶液要新鮮配製

原理

觸酶又稱過氧化氫酶，具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫成為水和原子態氧，繼而形成氧分子，出現氣泡。

試劑藥品

1.50m mol/l pH7.0的磷酸緩衝液

2.0.3% H₂0_2:吸0.5ml 30% H₂0₂加入pH7.0的磷酸緩衝液至 50ml

3.0.2% 愈創木酚 :秤0.2g愈創木酚加入pH7.0的磷酸緩衝液至 100ml

實驗步驟

酶液的製備

1.稱取葉片 0.25g ，加入5倍量的（M/V）pH7.0 的PBS冰浴研磨 15000r/min

離心15min取部分上清液經適當稀釋後用於酶活性測定。

2.CAT活性的測定

在3ml的反應體系中，包括0.3% H₂0₂1ml, H₂0 1.95ml, 最後加入0.05ml酶液

啟動反應，測定波長240nm處的OD降低速度。將每分鐘OD減少0.01定義為1個活力單位。

3.POD活性的測定

在3ml的反應體系中，包括0.3% H₂0₂1ml, .0.2% 愈創木酚0.95ml,pH7.0的PBS 1ml，最後加入0.05ml酶液啟動反應，記錄470nm處OD增加速度。將每分鐘OD增加0.01定義為1個活力單位。

4. 用考馬斯亮藍 G-250法測定蛋白含量.

結果

若立即出現大量氣泡為陽性。無氣泡為陰性。

套用

大多需氧和兼性厭氧菌均產生過氧化氫酶，但鏈球菌科陰性，故常用此試驗來鑑定。此外，金氏桿菌屬的細菌也為陰性。分枝桿菌的鑑別則用耐熱觸酶試驗，結核分枝桿菌為陰性，戈氏分枝桿菌和地分枝桿菌為陽性。

注意事項

①3%H2O2溶液要新鮮配製。

②不宜用血瓊脂平板上生長的菌落，因紅細胞含有觸酶，可致假陽性反應。

③取對數生長期的細菌。