檢測原理
膠體金標記,實質上是蛋白質等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷,與蛋白質的正電荷基團因
靜電吸附而形成牢固結合。用還原法可以方便地從氯金酸製備各種不同粒徑、也就是不同顏色的膠體金顆粒。這種球形的粒子對蛋白質有很強的吸附功能,可以與
葡萄球菌A蛋白、
免疫球蛋白、毒素、
糖蛋白、酶、
抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽綴合物等非
共價結合,因而在
基礎研究和臨床實驗中成為非常有用的工具。
免疫
金標記技術(Immunogold labelling techique) 主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性,在金標蛋白結合處,在顯微鏡下可見黑褐色顆粒,當這些標記物在相應的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色或粉紅色斑點,因而用於定性或半定量的快速
免疫檢測方法中,這一反應也可以通過銀顆粒的沉積被放大,稱之為免疫金銀染色。
常用檢測技術
細胞懸液
塗片或組織切片,可用膠體金標記的抗體進行染色,也可在膠體金標記的基礎上,以銀
顯影液增強標記,使被還原的銀原子沉積於已標記的金顆粒表面,可明顯增強膠體金標記的
敏感性。
可用膠體金標記的抗體或
抗抗體與負染病毒樣本或組織
超薄切片結合,然後進行負染。可用於病毒形態的觀察和病毒檢測。
斑點免疫金滲濾法
套用
微孔濾膜(如膜)作載體,先將
抗原或抗體點於膜上,封閉後加待檢樣本,洗滌後用膠體金標記的
抗體檢測相應的抗原或抗體。
膠體金免疫層析法
將
特異性的抗原或抗體以條帶狀固定在膜上,膠體金標記試劑(抗體或
單克隆抗體)吸附在結合墊上,當待檢樣本加到試紙條一端的樣本墊上後,通過
毛細作用向前移動,溶解結合墊上的膠體金標記試劑後相互反應,再移動至固定的抗原或抗體的區域時,待檢物與金標試劑的
結合物又與之發生
特異性結合而被截留,聚集在檢測帶上,可通過肉眼觀察到顯色結果。該法現已發展成為診斷試紙條,使用十分方便。
快速金標試劑技術
是將特異的抗體先固定於酸類纖維素膜的某一區帶,當該乾燥的酸類纖維素一端浸入樣品(尿液或血清)後,由於
毛細管作用,樣品將沿著該膜向前移動,當移動至固定有抗體的區域時,樣品中相應的抗原即與該抗體發生特異性結合。同時利用金粒具有高
電子密度的特性,在金標
蛋白結合處。當這些
標記物在相應的配體處大量聚集時,肉眼可見紅色的斑點。既為快速的金標檢測方法原理。生產快速而精確試劑,要點在於所採用的單克隆抗體、多元克隆抗體、抗原、
半抗原、蛋白嵌合物及膠體金等原料的
靈敏性及特異性等是否能達到最高的標準,此為金標試劑的質量之最重要的標準。