基本介紹
- 名稱：免疫印跡技術
- 所屬分類：生化檢查
正常值,臨床意義,注意事項,檢查過程,相關疾病,相關症狀,
正常值
無特殊顯色反應。
臨床意義
異常結果：有特殊顯色反應，證明有某種蛋白質存在。 需要檢查人群：檢查某種蛋白。
注意事項
不適宜人群：無 檢查時禁忌：無 檢查時禁忌：(1) 一抗、二抗的稀釋度、作用時間和溫度對不同的蛋白要經過預實驗確定最佳條件。 (2) 顯色液必須新鮮配置使用，最後加入H2O2。 (3) DAB有致癌的潛在可能，操作時要小心仔細。
檢查過程
(1) 蛋白質樣品獲得：細菌誘導表達後，可通過電泳上樣緩衝液直接裂解細胞，真核細胞加勻漿緩衝液，機械或超音波室溫勻漿0.5-1min。然後4℃，13,000g離心15min。取上清液作為樣品。 (2) 電泳：製備電泳凝膠，進行SDS-PAGE。 (3) 轉移：(半乾式轉移) ① 電泳結束後將膠條割至合適大小，用轉膜緩衝液平衡，5min×3次。 ② 膜處理：預先裁好與膠條同樣大小的濾紙和NC膜，浸入轉膜緩衝液中10min。 ③ 轉膜：轉膜裝置從下至上依次按陽極碳板、24層濾紙、NC膜、凝膠、24層濾紙、陰極碳板的順序放好，濾紙、凝膠、NC膜精確對齊，每一步去除氣泡，上壓500g重物，將碳板上多餘的液體吸乾。接通電源,恆流1mA/cm2，轉移1.5hr。轉移結束後，斷開電源將膜取出,割取待測膜條做免疫印跡。將有蛋白標準的條帶染色，放入膜染色液中50s後，在50%甲醇中多次脫色，至背景清晰，然後用雙蒸水洗，風乾夾於兩層濾紙中保存，留與顯色結果作對比。 (4) 免疫反應： ① 用0.01M PBS洗膜，5min ×3次。 ② 加入包被液，平穩搖動，室溫2hr。 ③ 棄包被液，用0.01M PBS洗膜，5min×3次。 ④ 加入一抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋，液體必須覆蓋膜的全部)，4℃ 放置12hr以上。陰性對照，以1%BSA取代一抗，其餘步驟與實驗組相同。 ⑤ 棄一抗和1%BSA，用0.01M PBS分別洗膜，5min×4次。 ⑥ 加入辣根過氧化物酶偶聯的二抗(按合適稀釋比例用0.01M PBS稀釋)，平穩搖動，室溫2hr。 ⑦ 棄二抗，用0.01M PBS洗膜，5min×4次。 8、加入顯色液，避光顯色至出現條帶時放入雙蒸水中終止反應。
相關疾病
格斯特曼綜合徵，小兒喘息樣支氣管炎，小兒幽門螺桿菌感染，肺出血－腎炎綜合徵，丁型病毒性肝炎，巨細胞病毒感染症，免疫反應，進行性肌營養不良症，胃潰瘍，泌尿生殖系真菌病
相關症狀
幽門前區潰瘍，腸黏膜有壞死潰瘍，潰瘍
