等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法

等溫滴定量熱法(Isothermal Titration Calorimetry,簡稱ITC),是一種研究生物熱力學與生物動力學的重要方法,它通過高靈敏度、高自動化的微量量熱儀連續、準確地監測和記錄一個變化過程的量熱曲線,原位、線上和無損傷地同時提供熱力學和動力學信息。

基本介紹

  • 中文名:等溫滴定量熱法
  • 外文名:Isothermal Titration Calorimetry
  • 英文簡稱:ITC
  • 釋義:研究生物熱力學動力學的方法
  • 用途:獲得生物分子完整熱力學參數
  • 套用範圍:10大範圍
實驗研究,用途,套用範圍,

實驗研究

微量熱法具有許多獨特之處。它對被研究體系的溶劑性質、光譜性質和電學性質等沒有任何限制條件,即具有非特異性的獨特優勢,樣品用量小,方法靈敏度和精確度高(本儀器最小可檢測熱功率2 nW,最小可檢測熱效應0.125uJ,生物樣品最小用量0.4ug,溫度範圍2 ℃ - 80 ℃,滴定池體積1.43 ml)。實驗時間較短(典型的ITC實驗只需30-60分鐘,並加上幾分鐘的回響時間),操作簡單(整個實驗由計算機控制,使用者只需輸入實驗的參數,如溫度、注射次數、注射量等,計算機就可以完成整個實驗,再由Origin軟體分析ITC得到的數據)。測量時不需要製成透明清澈的溶液,而且量熱實驗完畢的樣品未遭破壞,還可以進行後續生化分析。儘管微量熱法缺乏特異性但由於生物體系本身具有特異性,因此這種非特異性方法有時可以得到用特異方法得不到的結果,這有助於發現新現象和新規律,特別適應於研究生物體系中的各種特異過程。

用途

獲得生物分子相互作用的完整熱力學參數,包括結合常數、結合位點數、摩爾結合焓、摩爾結合熵、摩爾恆壓熱容,和動力學參數(如酶活力、酶促反應米氏常數和酶轉換數)。

套用範圍

蛋白質-蛋白質相互作用(包括抗原-抗體相互作用和分子伴侶-底物相互作用);蛋白質摺疊/去摺疊;蛋白質-小分子相互作用以及酶-抑制劑相互作用;酶促反應動力學;藥物-DNA/RNA相互作用;RNA摺疊;蛋白質-核酸相互作用;核酸-小分子相互作用;核酸-核酸相互作用;生物分子-細胞相互作用;……
加樣體積:(實際體積)
cell:1.43 ml,syringe:300 μl
準備樣品體積(最少量)
cell:2 ml,syringe:500 μl

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