苦參鹼與VASP互作抑制胃癌細胞遷移的機制研究

《苦參鹼與VASP互作抑制胃癌細胞遷移的機制研究》是依託武漢大學，由楊芳擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：苦參鹼與VASP互作抑制胃癌細胞遷移的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：楊芳
• 依託單位：武漢大學

項目摘要

胃癌是一種因易發生早期轉移導致預後較差的惡性腫瘤。苦參鹼具有抗腫瘤轉移效應，而VASP在腫瘤細胞遷移調控中具有重要作用，那么苦參鹼抗腫瘤轉移作用是否因苦參鹼與VASP互作引起？本研究針對這一問題，通過檢測苦參鹼處理前後胃癌細胞粘附率、遷移速度及VASP蛋白表達量，驗證苦參鹼抗腫瘤細胞遷移作用；通過原核表達VASP蛋白並純化，利用螢光淬滅法、圓二色光譜法及等溫滴定量熱法，研究苦參鹼與VASP互作對VASP結構的影響；利用ThT法、紫外濁度法及透射電鏡技術，研究苦參鹼與VASP互作對VASP功能的影響；利用siRNA技術沉默胃癌細胞VASP基因，再轉入VASP的表達載體，檢測苦參鹼對不同VASP表達水平腫瘤細胞遷移能力的影響。上述研究將證實VASP是調控腫瘤細胞遷移的關鍵蛋白，明確苦參鹼與VASP互作發揮抗腫瘤轉移作用的分子機制，並為篩選有抗腫瘤轉移作用的中草藥有效成分提供分子生物學相關信息。

結題摘要

苦參鹼是具有廣泛生物活性和低毒性的天然化合物，被用作抗癌中草藥已有悠久歷史，但苦參鹼的抗癌機制目前仍不明確。血管擴張刺激磷蛋白(vasodilator-smudated phosphoprotein,VASP)是一種肌動蛋白骨架調節蛋白，在肌動蛋白的結構重組、驅動細胞遷移和黏附中起著至關重要的作用。有報導苦參鹼能通過抑制VASP的磷酸化抑制人類癌症細胞的遷移、粘附和增殖，但是苦參鹼直接作用於VASP蛋白的確切機制仍不清楚。本課題組運用原核表達系統，表達純化人VASP蛋白，內源螢光光譜研究顯示苦參鹼與VASP蛋白的直接結合作用很微弱，圓二色譜研究顯示苦參鹼能影響VASP蛋白二級結構，50 μg/mL苦參鹼明顯改變VASP的二級結構。劃痕和細胞黏附實驗證明50 μg/mL苦參鹼能抑制人胃癌細胞BGC823的遷移和黏附。免疫螢光實驗表明苦參鹼能改變人胃癌細胞BGC823中VASP的分布，影響肌動蛋白Actin形成應力纖維。Western結果顯示苦參鹼能抑制胃癌細胞BGC823中VASP蛋白的磷酸化。G-actin聚集實驗表明苦參鹼在VASP蛋白時能抑制G-actin的聚集。總的來說，我們的結果顯示50 μg/mL的苦參鹼能通過影響VASP的結構抑制人胃癌細胞的黏附和遷移，這從一定程度上解釋了苦參鹼為什麼總在特定劑量影響腫瘤細胞的一種新機制。