基因突變檢測

基因突變檢測

基因突變檢測是指通過建立一系列電泳,分析DNA構象或解鏈特性,或者利用DNA變性和復性等特性,進行DNA突變的分析。該檢測方法對肺癌、乳腺癌、結直腸癌等腫瘤患者的早期篩查、診斷及預後具有重要意義。

基本介紹

  • 中文名:基因突變檢測
  • 檢測方法:焦磷酸測序法、高效液相色譜法等
  • 臨床套用:多種疾病的早期篩查、診斷及預後
  • 類型:對DNA突變的分析方法
常見檢測方法,臨床套用,

常見檢測方法

1.焦磷酸測序法
測序法的基本原理是雙脫氧終止法,是進行基因突變檢測的可靠方法,也是使用最多的方法。但其過程繁瑣、耗時長,靈敏度不高,對環境和操作者有危害,故在臨床套用中存在一定的限制。
2.單鏈構象異構多態分析技術
依據單鏈DNA在某一種非變性環境中具有其特定的第二構象,構象不同導致電泳的遷移率不同,從而將正常鏈與突變鏈分離出來。與測序法相比,靈敏性更高。
3.聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性分析技術
通過聚合酶鏈反應擴增出可能包含突變的基因組片段,然後利用限制性內切酶對這些聚合酶鏈反應片段進行酶切,電泳檢測後根據酶切片段的長度差異來判斷是否存在突變位點。該法一般用於檢測已知的突變位點。
4.探針擴增阻滯突變系統
又稱等位基因特異聚合酶鏈反應,是利用Tap DNA聚合酶缺少3′到5′外切酶活性,聚合酶鏈反應引物的3′端末位鹼基必須與其模板DNA互補才能有效擴增的原理。通過設計適當的引物以檢測突變基因。
5.高解析度溶解曲線分析技術
利用不同長度或不同鹼基組成的DNA序列溶解曲線不同的原理,在聚合酶鏈反應後直接運行高解析度溶解即可完成對樣品突變分析。該技術是一種靈敏度100%的表皮生長因子受體基因突變篩選技術,可用於體細胞突變的檢測。
6.高效液相色譜法
該方法是基於發生錯配的雜合雙鏈DNA與完全匹配的純合雙鏈DNA解鏈特徵的差異而進行檢測的,可檢測出含有單個鹼基的置換、插入或缺失的異源雙鏈片段。與測序法相比,該法簡單、快速,不僅可用於已知突變的檢測,還可用於未知突變的掃描。但只能檢查有無突變,不能檢測出突變類型,結果判斷容易出錯。
7.微數字聚合酶鏈反應
該方法為將樣品作大倍數稀釋和細分,直至每個細分試樣中所含有的待測分子數不超過1個,再將每個細分試樣同時在相同條件下聚合酶鏈反應後,通過基因晶片逐個計數。該方法為絕對定量的方法。

臨床套用

基因突變檢測可用於多種疾病的早期篩查、診斷及預後判斷。多種惡性腫瘤,如惡性黑色素瘤甲狀腺癌結直腸癌、肺癌等存在不同比例的B-raf基因突變;結直腸癌、胰腺癌、肺癌等存在不同比例的K-ras基因突變。良性腫瘤的患者若是檢出B-raf或K-ras基因突變,提示有腫瘤惡變的可能。PIK3CA基因突變檢測,對肺癌、乳腺癌、結直腸癌等腫瘤患者的早期篩查、診斷及預後具有重要意義。

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