動物學實驗:實驗常用試劑,常見處理方法,擴展知識,內容簡介,目錄,

《動物學實驗》是2010年浙江大學出版社出版的圖書，作者是姜乃澄、盧建平。本書主要介紹了實驗常用試劑、實驗動物常見的處理方法等內容。

基本介紹

書名：動物學實驗
作者：姜乃澄、盧建平
ISBN：9787308072540
頁數： 218
定價：20.00
出版社：浙江大學出版社
出版時間：2010-6-1
裝幀：平裝膠版紙
開本： 16開
字　數：356000

實驗常用試劑,常見處理方法,擴展知識,內容簡介,目錄,

實驗常用試劑

【反應劑】

1、檢驗葡萄糖

配方一本尼迪克（Benedict）溶液

（1）在400毫升蒸餾水中溶解85克檸檬酸鈉和50克無水碳酸鈉。

（2）在50毫升加熱的蒸餾水中溶解8.5克硫酸銅。

把硫酸銅溶液緩緩倒入檸檬酸鈉-碳酸鈉溶液中，邊加邊攪拌，如果產生沉澱，要過濾。本尼迪克溶液配製後能長期使用（存放時間較久而產生沉澱是，取上層清液使用，不必重新配製）。

本尼迪克溶液用來測試食物、血液和尿中的葡萄糖，可測出0.15 ～0.20%的葡萄糖。這種溶液跟未知物同加熱時，如果未知物中有葡萄糖，會形成紅色的氧化亞銅沉澱物。

配方二裴林（Fehling）溶液

（1）把34.5克硫酸銅溶於500毫升蒸餾水中。

（2）把125克氫氧化鉀（鈉）和173克酒石酸鉀鈉溶解在500毫升蒸餾水中。

上述兩種溶液應分別保存。在檢測葡萄糖時，使他們等量的混合，加入待測物的試管內，加熱到沸騰。如果有葡萄糖，會形成紅色的氧化亞銅沉澱物。

2、檢查澱粉的試劑

魯哥氏（Lugol's）溶液（碘液）

取6克碘化鉀溶於20毫升蒸餾水中，攪拌到溶解後，加入4克碘，等碘充分溶解，在加入80毫升蒸餾水，貯存在棕色試劑瓶內。

碘液用來測試食物樣品或葉片中的澱粉，也用作染色劑，例如可染色鞭毛、纖毛和細胞核等。

3、檢查蛋白質的試劑

配方一米倫（Millon）試劑

在60毫升濃硝酸（比重1.42）中溶解40克汞（水浴加溫可助溶），溶解後加入兩倍體積的蒸餾水稀釋，靜置澄清後，取它上層的清液備用。這種試劑可長期保存。

在待測物中加入少量米倫試劑，加熱，如果有蛋白質，會出現紅色。這種試劑不能用來測定尿中的蛋白質。

配方二雙縮尿試劑

分別配製10%氫氧化鈉溶液和1%硫酸銅溶液。

在3毫升待測物中加入1毫升10%氫氧化鈉溶液和1滴1%硫酸銅溶液。如果有蛋白質，會出現紫色反應。

4、檢查脂肪的試劑

蘇丹Ⅲ（Ⅳ）酒精飽和溶液

取0.2克蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ），放入純酒精中，加熱，使它充分溶解，成為飽和酒精溶液，過濾後密閉在試劑瓶內保存備用。

5、酸鹼指示劑

配方一酚酞試劑和試紙

酚酞試劑取1克酚酞，溶解在100毫升60%的酒精溶液里，裝在試劑瓶內密閉保存。

酚態試紙取1克酚酞，溶解在100毫升95%酒精溶液里，加入00毫升蒸餾水。把綠紙條放入酚酞溶液中浸濕後，取出，放在無氨氣影響處晾乾。

酚泰試劑（試紙） pH值變色範圍8.2～10，在酸性和中性溶液中都無色，再鹼性溶液中呈深紅色。

配方二紅藍石蕊試紙

取市售石蕊1克，放在80毫升10%酒精溶液中攪拌，使它溶解，然後過濾。把濾液分成兩份。1份滴入稀磷酸或稀硫酸，到出現紅色為止。另1份滴入稀氫氧化鈉溶液，到出現藍色為止。在上述製備的溶液中分別浸濕濾紙條，隨後取出濾紙條，放在蔽光處、無酸鹼性氣體影響的地方晾乾，即的紅、藍兩種石蕊試紙。

紅石蕊試紙在鹼性溶液中變藍，藍石蕊試紙在酸性溶液中變紅。

6、檢查二氧化碳的試劑

檢查二氧化碳的試劑，可用溴代麝香草酚藍溶液和石灰水。

配方一溴代麝香草酚藍溶液

取0.1克溴代麝香草酚藍，溶解在100毫升蒸餾水里，滴入少量0.1%氫氧化鉀溶液，使它成為弱鹼性溶液而呈藍色。

溴代麝香草酚藍溶液pH值變色範圍是6.0（黃）～7.6（藍）。待測物中如果有二氧化碳，會形成碳酸而使溶液變成黃色。

配方二石灰水

在蒸餾水中加入生石灰（氧化鈣），變加邊攪拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈飽和狀態時為止。在石灰水澄清後，傾出上層清液，用濾紙過濾，放在密閉瓶內保存。

如果測定的物質中有二氧化碳，會生成碳酸鈣，使石灰水變渾濁。

7、檢查細胞生活力的試劑

檢查細胞有無生活力，可用中性紅甲基藍試劑。配製的方法是先分別配製1%中性紅溶液和1%甲基藍溶液，這兩種溶液各取1份混合，用來鑑定細胞的死活。該試劑使活細胞的液泡染上紅色，而使死細胞全部染成藍色。

常見處理方法

實驗動物的編號和分組

一、編號

實驗動物常需要標記以示區別。編號的方法很多，根據動物的種類數量和觀察時間長短等因素來選擇合適的標記方法。

(一)掛牌法：將號碼烙壓在圓形或方形金屬牌上(最好用鋁或不鏽鋼的,它可長期使用不生鏽),或將號碼按實驗分組編號烙在栓動物頸部的皮帶上，將此頸圈固定在動物頸部。該法適用於狗等大型動物。

(二)打號法：用刺數鉗(又稱耳號鉗)將號碼打在動物耳朵上。打號前用蘸有酒精的棉球擦淨耳朵，用耳號鉗刺上號碼，然後在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。該法適用於耳朵比較大的兔、狗等動物。

(三)針刺法：用七號或八號針頭蘸取少量碳素墨水，在耳部、前後肢以及尾部等處刺入皮下，在受刺部位留有一黑色標記。該法適用於大小鼠、豚鼠等。在實驗動物數量少的情況下，也可用於兔、狗等動物。

(四)化學藥品塗染動物被毛法：經常套用的塗染化學藥品有

塗染紅色：0.5%中性紅或品紅溶液

塗染黃色：3-5%苦味酸溶液

塗染黑色：煤焦油的酒精溶液

根據實驗分組編號的需要，可用一種化學藥品塗染實驗動物動物背部被毛就可以。如果實驗動物數量較多，則可以選擇兩種染料。該方法對於實驗周期短的實驗動物較合適，時間長了染料易退掉；對於哺乳期的子畜也不適合，因母畜容易咬死子畜或把染料舔掉。

(五)剪毛法：該法適用於大、中型動物，如狗、兔等。方法是用剪毛刀在動物一側或背部剪出號碼，此法編號清楚可靠，但只適於短期觀察。

(六)打孔或剪缺口法：可用打孔機在兔耳一定位置打一小孔來表示一定的號碼。如用剪子剪缺口,應在剪後用滑石粉捻一下,以免癒合後看不出來。該法可以編至1～ 9999號，此種方法常在飼養大量動物時作為終身號採用。

二、分組

(一)分組的原則：進行動物實驗時，經常需要將選擇好的實驗動物按研究的需要分成若干組。動物分組應按隨機分配的原則，使每隻動物都有同等機會被分配到各個實驗組與對照組中去，以避免各組之間的差別,影響實驗結果，特別是進行準確的統計檢驗,必須在隨機分組的基礎上進行。

每組動物數量應按實驗周期長短、實驗類型及統計學要求而定。如果是慢性實驗或需要定期處死動物進行檢驗的實驗，就要求選較多的動物，以補足動物自然死亡和認為處死所喪失的數量，確保實驗結束時有合乎統計學要求的動物數量存在。

(二)建立對照組：分組時應建立對照組。1.自身對照組：是指實驗數據而言。實驗動物本身在實驗處理前、後兩個階段的各項相關數據就分別是對照組和實驗組的實驗結果，此法可排除生物間的個體差異。2.平行對照組：有正對照組和負對照組兩種。給實驗組動物某種處理，而給正對照組用同樣方法進行處理，但並不採用實驗所要求的藥物或手段，負對照組則不給任何處理。3.具體分組時，應避免人為因素, 隨機把所有的動物進行編號，然後令其雙數為A組(實驗組),單數為B組(對照組)即可或反之。如果要分若干個組時，應該用隨機數字表示進行完全隨機分組。

動物的除毛、給藥方法

一、實驗動物的除毛

在動物實驗中，被毛有時會影響實驗操作與觀察，因此必須除去。除去被毛的方法有剪毛、拔毛、剃毛和脫毛等。

(一)剪毛法：剪毛法是將動物固定後，先用蘸有水的紗布把被毛浸濕，再用剪毛剪刀緊貼皮膚剪去被毛。不可用手提起被毛，以免剪破皮膚。剪下的毛應集中放在一容器內，防止到處飛揚。給狗、羊等動物採血或新生乳牛放血製備血清常用此法。

(二)拔毛法：拔毛法是用拇指和食指拔去被毛的方法。在兔耳緣靜脈注射或尾靜脈注射時常用此法。

(三)剃毛法：剃毛法是用剃毛刀剃去動物被毛的方法。如動物被毛較長，先要用剪刀將其剪短，再用刷子蘸溫肥皂水將剃毛部位浸透，然後再用剃毛刀除毛。本法適用於暴露外科手術區。

(四)脫毛法：脫毛法是用化學藥品脫去動物被毛的方法。首先將被毛剪短，然後用棉球蘸取脫毛劑，在所需部位塗一薄層，2～3分鐘後用溫水洗去脫落的被毛，用紗布擦乾，再塗一層油脂即可。

適用於狗等大動物的脫毛劑配方為：硫化鈉10g，生石灰15g，溶於100ml水中。

適用於兔、鼠等動物的脫毛劑的配方為：1. 硫化鈉3g,肥皂粉1g,澱粉7g,加適量水調成糊狀；2. 硫化鈉8g,澱粉7g，糖4g，甘油5g，硼砂1g,加水75ml；3. 硫化鈉8g溶於100ml水中。

二、實驗動物的給藥

在動物實驗中，為了觀察藥物對機體功能、代謝及形態引起的變化，常需要將藥物注入動物體內。給藥的途徑和方法多種多樣，可根據實驗目的、實驗動物種類和藥物劑型、劑量等情況確定。

(一)注射給藥法

1. 皮下注射　注射時用左手拇指及食指輕輕捏起皮膚，右手持注射器將針頭刺入,固定後即可進行注射。一般小鼠在背部或前肢腋下，大鼠在背部或側下腹部；豚鼠在後大腿內側、背部等脂肪少的部位；兔在背部或耳根部注射；蛙可在脊背部淋巴囊注射；狗多在大腿外側注射，拔針時，輕按針孔片刻，防藥液逸出。

2. 皮內注射　此法用於觀察皮膚血管的通透性變化或觀察皮內反應。如將一定量的放射性同位素溶液、顏料或致炎物質、藥物等注入皮內，觀察其消失速度和局部血液循環變化，作為皮膚血管通透性觀察指標之一。方法是：將動物注射部位的毛剪去，消毒後，用皮試針頭緊貼皮膚皮層刺入皮內，然後使針頭向上挑起並再稍刺入，即可注射藥液。注射後可見皮膚表面鼓起一白色小皮丘。

3. 肌肉注射　當給動物注射不溶於水而混懸於油或其他溶劑中的藥物時,常採用肌肉注射。肌肉注射一般選用肌肉發達、無大血管經過的部位，多選臀部。注射時針頭要垂直快速刺入肌肉，如無回血現象即可注射。給大、小鼠作肌肉注射時，選大腿外側肌肉進行注射。

4. 腹腔注射　先將動物固定,腹部用酒精棉球擦試消毒，然後在左或右側腹部將針頭刺入皮下，沿皮下向前推進約0.5厘米，再使針頭與皮膚呈45 度角方向穿過腹肌刺入腹腔，此時有落空感，回抽無腸液、尿液後，緩緩推入藥液。此法大小鼠用的較多。

5. 靜脈注射　是將藥液直接注射於靜脈管內，使其隨著血液分布全身,迅速奏效。但排泄較快，作用時間較短。

6. 淋巴囊注射　蛙類常採用此法,其皮下有數個淋巴囊，注入藥物甚易吸收。腹部淋巴囊和頭部淋巴囊常作為蛙類給藥途徑。一般多選用腹部淋巴囊給藥。注射時將針頭從蛙大腿上端刺入，經大腿肌層入腹壁肌層，再進入腹壁皮下，即進入淋巴囊，然後注入藥液。

(二)經口給藥法

1. 口服法：把藥物放入飼料或溶於飲水中讓動物自動攝取。此法優點在於簡單方便，缺點是不能保證劑量準確。一般適用於對動物疾病的防治或某些藥物的毒性實驗，製造某些與食物有關的人類疾病動物模型。

2. 灌胃法：在急性實驗中,多採用灌胃法。此法劑量準確。灌胃法是用灌胃器將所應投給動物的藥灌到動物胃內。灌胃器由注射器和特殊的灌胃針構成。小鼠的灌胃針長約4～5cm，直徑為1mm，大鼠的灌胃針長約6～8cm，直徑約1.2mm。灌胃針的尖端焊有一小圓金屬球，金屬球為中空的。焊金屬球的目的是防止針頭刺入氣管或損傷消化道。針頭金屬球端彎曲成20°左右的角度，以適應口腔、食道的生理彎曲度走向。

(三)其它途徑給藥方法

1. 呼吸道給藥：呈粉塵、氣體及蒸氣或霧等狀態的藥物或毒氣,均需要通過動物呼吸道給藥。如實驗時給動物乙醚作吸入麻醉、用鋸末煙霧製作慢性氣管炎動物模型等，特別在毒理學實驗中套用更為廣泛。

2. 皮膚給藥：為了鑑定藥物或毒物經皮膚的吸收作用、局部作用、致敏作用和光感作用等，均需採用經皮膚給藥方法。如兔和豚鼠常採用背部一定面積的皮膚脫毛後，將一定的藥液塗在皮膚上，藥液經皮膚吸收。

3. 脊髓腔內給藥：此法主要用於錐管麻醉或抽取腦脊液。

4. 腦內給藥：此法常用於微生物學動物實驗,將病原體等接種於被檢動物腦內，然後觀察接種後的各種變化。

5. 直腸內給藥：此種方法常用於動物麻醉。兔直腸內給藥時,常採用灌腸的膠皮管或用14號導尿管代替。

6. 關節腔內給藥：此法常用於關節炎的動物模型複製。

擴展知識

無特定病原體（Specefic pathogen Free,SPF）動物是指機體內無特定的微生物和寄生蟲存在的動物，但非特定的微生物和寄生蟲是容許存在的。一般指無傳染病的健康動物，是目前國外使用最廣泛的實驗動物，它的來源，既可來自無菌動物繁育的後裔，亦可經剖胎取後，在隔離屏障設施的環境中，由SPF親代動物撫育。它不帶有對人或動物本身致病的微生物，但不能排除可經胎盤屏障垂直傳播的微生物。

由於用疫苗和藥物進行預防及治療，或用淘汰帶菌動物來作出SPF動物的方法並不實用（既浪費時間，又難保確除病原），故一般大多先培育無菌動物或悉生動物後，再把其移到有封閉系統設施中去飼育繁殖。原則上SPF動物室內不容許存在病原菌，但在封閉的環境中，難免有很多非病原性微生物會逐漸進入動物機體中去，故亦有人把這個轉移過程稱之為通常動物化。SPF動物的祖先是無菌動物，按理來說，無菌動物的子宮內和卵中是無菌的，然而，有些微生物實際上是通過其親代傳給胎兒的，因此，培育無菌動物和SPF動物之前，就必須考慮這個問題。即應該嚴格地選擇剖腹產母體，該動物應未感染上規定的各種微生物和寄生蟲，最好通過幾代連續剖腹，來培育原種無菌動物後再培育SPF動物。

“SPF”一詞的含義是不明確的，因為在特定條件下，“非”病原體是可以成為病原體的。而且有些病原體缺乏有效的檢查手段。“SPF”是多年來使用的名稱。截至2013年還沒有更好的統一的名稱，所以仍沿用。有COBS（經剖腹產取得並飼養在屏障中的）、BS（在屏障系統中飼養）、DF（無病）等不同名稱的，都是指“SPF”動物。

內容簡介

根據我校教學實際和多年的教學經驗，本實驗教材在保留22個實驗的基礎上，又增加了2個基礎實驗，分別是：“多細胞動物的早期胚胎髮育”及“烏賊的解剖”。同時，著力編寫了5種常見無脊椎動物的解剖實驗作為附錄內容，以增加高校動物學實驗材料的選擇度，也供有興趣的學生進一步學習和提高動物學實驗技能之用。

為了能使學生在實驗過程中最大限度地方便使用，並在實驗中做到獨立觀察和操作，作者重新自繪、改繪及收錄了實驗用圖364，幅，同時增加了複習思考和必要的作業題，以鞏固每一個動物實驗的步驟、方法、技能，並通過實驗作業來加深對理論知識的理解和掌握。

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