分子排阻色譜法

分子排阻色譜法又稱空間排阻色譜法（SEC）是利用多孔凝膠固定相的獨特性產生的一種，主要根據凝膠孔隙的孔徑大小與高分子樣品分子的線團尺寸間的相對關係而對溶質進行分離的分析的方法。分子排阻色譜又叫凝膠色譜法。

基本介紹

• 中文名：分子排阻色譜法
• 外文名：SEC
• 別稱：空間排阻色譜法,凝膠色譜法
• 套用學科：儀器分析

分類

分類 ：凝膠過濾色譜法- GFC （採用水溶液或緩衝液作為流動相）和凝膠滲透色譜法 - GPC（採用有機溶劑作為流動相）

適用範圍

適用範圍：適用於對未知樣品的探索分離，它能很快提供樣品按分子大小組成的全面情況，並迅速判斷樣品是簡單的還是複雜的混合合物，並提供樣品中各組分的近似分子量。這種分離方法不宜用於分子大小組成相似或分子大小僅差10%的組分分析，如同分異構體的分離不宜用分子排阻色譜法。

分離機理

1、主要取決於凝膠的孔徑大小與被分離組分分子尺寸之間的關係，與流動相的性質沒有直接的關係。

2、樣品分子與固定相之間不存在相互作用，色譜固定相是多孔性凝膠，僅允許直徑小於孔徑的組分進入，這些孔對於溶劑分子來說是相當大的，以致溶劑分子可以自由的擴散出入。樣品中的大分子不能進入凝膠孔洞而完全被排阻，只能沿多孔凝膠粒子之間的空隙通過色譜柱，首先從柱中被流動相洗脫出來；中等大小的分子能進入凝膠中一些適當的孔洞中，但不能進入更小的微孔，在柱中受到滯留，較慢地從色譜柱洗脫出來；小分子可進入凝膠中絕大部分孔洞，在柱中受到更強的滯留，會更慢的被洗脫出；溶解樣品的溶劑分子，其分子量最小，可進入凝膠的所有孔洞，最後從柱中流出，從而實現具有不同分子大小樣品的完全分離。在分子排阻色譜法中，溶劑分子最後從柱中流出，這一點明顯不同於其他液相色譜法。

3、在SEC中，不同尺寸樣品分子的分布係數K總保持在0~1之間。K=0 說明溶質完全被排除在填料孔外，稱為全排斥，即填料的排斥極限；K=1 說明溶質可完全進入填料孔內。稱為全滲透，即填料的滲透極限。

4、對與某一大小分子其洗脫一體積等於流動相體積與該尺寸溶質可以滲透進入空洞內部的那部分體積的總和。Ve=Vo+KVp

固定相：凝膠 按機械強度分 軟質凝膠（葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯醯胺凝膠）；半剛性凝 膠（苯乙烯-二乙烯基苯共聚物）；剛性凝膠（高交聯度苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、多孔球形矽膠、羥基化聚醚多孔微球）。按化學性質分 有機凝膠（均勻凝膠、半均勻凝膠、非均勻凝膠）；無機凝膠（非均勻凝膠）。

流動相

凝膠滲透色譜法：常用四氫呋喃 三氯乙烷

凝膠過濾色譜法：以水為主體，具有不同PH值得多種緩衝溶液，所有溶劑使用前均要以微孔濾膜或5號砂芯漏斗過濾。除此之外，還需根據所分離的化合物性質向流動相中加入一些添加劑以改善保留和分離效果。如當使用親水性有機凝膠作為固定相時，為消除體積排阻色譜法中不希望存在的吸附作用與基體的疏水作用，通常在流動相中加入少量的無機鹽，以維持流動相的離子強度在0.1—0.5，減少副作用。