《microRNA200b調控樹突狀細胞發育分化的分子機制研究》是依託中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院，由張毅擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA200b調控樹突狀細胞發育分化的分子機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張毅
- 依託單位：中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
樹突狀細胞（DC）是機體免疫反應最重要的始動者，由造血幹細胞分化而來的DC在不同的誘導條件下可發育成為表型和功能各異的亞群，從而調控機體的免疫反應和免疫耐受，研究DC的發育分化機制具有重要的科學意義。microRNA（miRNA）作為新近發現的調控發育分化極其重要的調節子，它主要通過對基因表達的轉錄後調節而發揮其調控作用，但到目前為止miRNA是如何調控DC的發育分化尚不清楚。為此，我們經計算機預測篩選了多條與DC發育分化相關的miRNA，前期實驗結果發現miRNA200b在調控CD14+單核細胞向DC分化過程中起非常重要的作用，以此展開miRNA200b調控造血幹細胞和循環血單核細胞向DC分化的體內外系統分子機制研究，進一步利用小鼠移植物抗宿主病模型探討其體內調控DC作用，揭示miRNA 對DC發育分化調控的分子機制，為DC的臨床套用和解決移植排斥提供有效的理論與實驗依據。
結題摘要
由造血幹細胞分化而來的樹突狀細胞（dendritic cell, DC）是機體免疫反應最重要的始動者，其在不同的誘導條件下可發育成為表型和功能各異的亞群，從而調控機體的免疫反應和免疫耐受，研究DC的發育分化機制具有重要的科學意義。microRNA（miR）作為新近發現的調控發育分化極其重要的調節子，它主要通過對基因表達的轉錄後調節而發揮其調控作用，但到目前為止miR是如何調控DC的發育分化尚不清楚。近年的研究結果顯示，miR調控DC的發育分化和功能，在這個過程中miR通過上調影響其功能的發揮。那么miR下調是否影響DC的發育分化和功能？為此我們通過以往文獻調研和實驗研究發現，miR-15a、16 、17、19a、19b、25、26、93、106b、142-5p、199a、200b在DC的發育過程中呈現下降趨勢，隨著培養時間的延長，表達逐漸降低，其中以miR-200b下降最為顯著。以此展開miR-200b調控外周血單核細胞向DC分化的體內外系統分子機制研究，結果表明，轉染miR-200b mimic可抑制成熟DC的毛刺形成，未成熟DC（immature, iDC）吞噬能力下降明顯，提示miR-200b可能阻礙了iDC的發育；對DC生物學功能影響結果顯示，miR-200b可顯著降低成熟DC（mature, mDC）刺激T細胞增殖的能力，且顯著下調DC的遷移能力，說明miR-200b影響DC的發育分化。針對miR-200b調控DC發育分化的作用機制，根據生物信息學預測結合Q-PCR和Western blot檢測，發現WASF3在DC發育過程中變化最為顯著，隨著DC的成熟其表達逐漸上升；將miR-200b轉入mDC， WASF3表達則顯著下降。螢光素酶報告基因檢測結果表明，miR-200b直接作用於WASF3 3’UTR的保守靶序列。進一步驗證其對DC生物學特性影響，結果顯示miR-200b通過作用WASF3調控DC的免疫功能與遷移能力；且主要通過WASF3調控細胞骨架重塑達到抑制DC遷移的作用。為探討miR-200b體內對DC發育分化的影響，我們建立了小鼠急性移植物抗宿主病模型，結果表明，選擇合適的照射劑量可建立高效穩定的小鼠aGVHD模型，為今後深入研究miRNA 對DC發育分化調控的分子機制提供了可靠的理論與實驗依據。上述研究結果發表學術論文5篇，培養1名碩士研究生。
