《microRNA調控乳腺癌啟動細胞向血管內皮細胞轉化的機制研究》是依託中山大學，由於風燕擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：microRNA調控乳腺癌啟動細胞向血管內皮細胞轉化的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：於風燕
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
成瘤性腫瘤啟動細胞是乳腺癌發生、擴散、轉移和復發的源泉，腫瘤啟動細胞來源的新生血管的生成在腫瘤的發生侵襲轉移的過程中均發揮著重要作用。本項目將在前期對乳腺癌啟動細胞microRNA調控機制研究的基礎上，進一步建立體外誘導乳腺癌啟始細胞向血管內皮細胞分化的模型，篩選乳腺癌啟動細胞向血管內皮細胞方向分化過程中差異表達的miRNA，分析miRNA調控腫瘤啟動細胞向血管內皮細胞分化的靶基因蛋白，並在體外和體內腫瘤啟動細胞分化模型中通過干預miRNA表達探索其對腫瘤啟動細胞分化方向的調控作用，以及由此對腫瘤成瘤、侵襲和轉移的影響。本研究將是腫瘤組織中新生血管生成的分子機制研究的新切入點，為闡明miRNA調控腫瘤啟動細胞分化命運的機制奠定基礎，並為研製腫瘤抗血管靶向治療提供新的基因干擾靶點。
結題摘要
我們首先建立體外誘導乳腺癌幹細胞向血管內皮細胞分化的模型；分析了乳腺癌幹細胞向血管內皮細胞分化前後的miRNA表達差異，並篩選出調控這一分化過程的miRNA及下游信號通路；探討引起靶miRNA表達差異的機制；體內實驗觀察該miRNA對腫瘤生長、轉移和血管生成的影響。並且還研究了microRNA調控乳腺癌幹細胞其他的生物學特性，包括上皮-間質轉化，自我更新能力，化療耐藥等；另外我們還研究了腫瘤微環境中的CCL18通過microRNA調控乳腺癌細胞的侵襲和轉移。 我們從乳腺癌細胞株或原代乳腺癌細胞富集的乳腺癌幹細胞經過VEGF誘導2周后能表達VEGFR2、CD31和vWF等內皮細胞標記物，在matrigel三維培養中成管，受組胺刺激後能釋放vWF，並促使細胞內源性VEGF的分泌。但非乳腺腫瘤啟動細胞受VEGF刺激後不能表達上述內皮細胞標記物，也無法在三維培養中成管。 miR-27a在VEGF誘導的乳腺癌幹細胞中的表達為未誘導細胞的15.36倍。EMSA和ChIP實驗表明VEGF能促使乳腺癌幹細胞內的轉錄因子Runx1與miR-27a基因上游的調控序列結合，沉默細胞Runx1的表達後，miR-27a水平下降。通過調控mir-27a的表達水平，我們發現miR-27a水平上調能促使癌幹細胞表達內皮細胞標記，下調能降低內皮標記物的表達、成管能力和抑制內源性VEGF的分泌。 miR-27a通過抑制靶蛋白ZBTB10，升高轉錄因子Sp1以及Sp1依賴的VEGFR2和VEGF的表達水平，從而影響VEGF誘導的內皮分化過程。在動物模型中，我們發現高表達miR-27a和低表達ZBTB10的荷植瘤生長較快，較易發生肝肺遠處轉移。與對照組相比，實驗組瘤內血管管腔較大，微血管密度增高。 因此，VEGF誘導的乳腺癌幹細胞能分化成有功能的血管內皮細胞。在VEGF誘導的乳腺癌幹細胞中，VEGF通過Runx1/miR-27a/ZBTB10/Sp1來調控乳腺癌幹細胞向血管內皮細胞分化的過程。miR-27a可以促進乳腺腫瘤的生長和轉移。
