mTOR調控巨噬細胞極化參與肝臟缺血再灌注損傷的機制

《mTOR調控巨噬細胞極化參與肝臟缺血再灌注損傷的機制》是依託上海交通大學，由朱建軍擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：mTOR調控巨噬細胞極化參與肝臟缺血再灌注損傷的機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：朱建軍
• 依託單位：上海交通大學

項目摘要

肝臟缺血再灌注損傷（IRI）是肝臟移植術後移植物功能障礙的主要原因之一，固有免疫反應在這一病理過程中發揮重要調節作用。巨噬細胞（Kupffer細胞）作為固有免疫反應的主要參與者，在肝臟IRI中的調節作用仍未完全闡明。我們的前期研究結果表明，在小鼠肝臟IRI模型中，哺乳動物雷帕黴素受體複合物1（mTORC1）和複合物2（mTORC2）顯示出不同的炎症調節作用。此外，諸多體內外實驗顯示mTOR對巨噬細胞極化亦具有調節作用。由此我們推測，mTOR通過調控巨噬細胞的極化方向，即具有促炎作用的經典活化M1型和具有抗炎作用的選擇性活化M2型巨噬細胞，從而調節肝臟IR損傷過程中的炎症反應。我們擬採用小鼠70%肝臟熱缺血再灌注損傷模型，通過髓系敲除Rictor基因抑制mTORC2的活性，觀察其對巨噬細胞極化的調節和對炎症反應的影響，並進一步闡明其調節機制，從而為臨床改善肝臟IR損傷尋找新的治療靶點。

結題摘要

目的：肝臟缺血再灌注損傷是臨床過程中常見的一種病理生理過程，常常會導致嚴重的後果。自噬是由溶酶體介導的細胞自我吞噬的現象，其在缺血再灌注損傷中發揮重要作用。Rictor是mTORC2的特異性結合蛋白，在肝臟缺血再灌注損傷發生髮展中的作用及其機制尚不明確。本研究旨在探討Rictor蛋白通過調節自噬在肝臟缺血再灌注損傷中的機制研究。方法：體內實驗建立小鼠肝臟缺血再灌注損傷模型，體外實驗建立小鼠原代肝細胞缺氧/復氧損傷模型；分別採用ELISA、qRT-PCR、Western blot、免疫組織化學等方法檢測小鼠肝臟損傷程度以及免疫細胞的浸潤程度和炎症因子的釋放水平；採用細胞毒性實驗檢測缺氧/復氧過程中肝臟細胞損傷程度；分別採用Western Blot、透射電鏡和免疫螢光等方法檢測肝臟缺血再灌注和缺氧/復氧損傷過程中自噬的變化；採用Western Blot檢測自噬相關信號通路、Rictor/mTORC2信號通路的變化。結果：Rictor蛋白的表達量隨著再灌注時間的增加而逐漸增加，在小鼠體內敲低Rictor蛋白表達，再灌注之後小鼠血清轉氨酶水平明顯增加，肝臟組織損傷區域明顯增多，炎症細胞浸潤明顯增加，活性氧ROS水平也明顯增加。Rictor 蛋白缺失在缺血再灌注損傷中降低了細胞自噬水平並且激活了MAPK信號通路。結論：Rictor蛋白的缺失通過減輕自噬並且激活MAPK信號通路而加重小鼠肝臟缺血再灌注損傷。