《小鼠骨髓MSC調控單核/巨噬細胞修復肝損傷的機制研究》是依託江蘇大學，由毛飛擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：小鼠骨髓MSC調控單核/巨噬細胞修復肝損傷的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：毛飛
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
骨髓間質幹細胞（mesenchymal stem cell, MSC）可通過橫向分化、旁分泌及其他途徑參與肝損傷的修復。在肝損傷修復中，消除病變部位的炎症具有重要意義。單核/巨噬細胞作為炎症反應重要成員是否在骨髓MSC調控下介導肝損傷的修復，其作用的分子機制值得研究。在本課題組完成MSC修復四氯化碳誘導的小鼠肝損傷模型及MSC免疫調節功能研究的基礎上，本課題擬採用基因晶片分析、RT-PCR、實時定量PCR、Western blotting及免疫組化等技術在體內外研究骨髓MSC對單核/巨噬細胞的作用機制以及骨髓MSC通過對單核/巨噬細胞的調控來修復肝損傷的機制，為臨床套用骨髓MSC治療肝損傷提供新的實驗依據，具有潛在的臨床套用價值。
結題摘要
目的：本課題探討了小鼠骨髓間質幹細胞（mesenchymal stem cells, MSCs）在炎症條件下對巨噬細胞的極化表型和功能的影響，並對相關機制進行了初步研究，為進一步探索MSCs的免疫調節作用和促進損傷修復的機制提供依據。 方法： 分離培養小鼠骨髓MSCs，體外與小鼠巨噬細胞株RAW264.7或磁珠分選的小鼠脾臟CD11b陽性細胞間接共培養，LPS作為刺激因素，qRT-PCR及ELISA檢測巨噬細胞M1/M2相關因子表達水平。流式細胞術及免疫螢光技術檢測RAW264.7細胞M2標記CD206的表達情況。細胞計數和MTT實驗觀察MSC條件培養基（MSC-CM）對RAW264.7細胞增殖能力的影響。Tranwell遷移實驗探討MSCs對RAW264.7細胞遷移功能的影響。此外，採用Western blot 方法研究MSC-CM對RAW264.7細胞M1/M2相關信號通路NF-κB和STAT3的影響。 結果：MSCs作用於RAW264.7細胞，降低M1細胞因子TNF-α基因水平而升高M2相關基因IL-10、Arg-1表達水平。MSC-CM能使RAW264.7細胞IL-6分泌水平降低，而使IL-10分泌水平增高。MSCs培養上清在LPS存在的條件下能降低脾臟巨噬細胞TNF-α表達水平，增高Arg-1表達水平。MSC-CM增加RAW264.7細胞M2型標記CD206表達。細胞計數結果表明MSC-CM作用組與對照組相比能增加RAW264.7細胞數量。MSCs能顯著增加RAW264.7細胞的遷移數量。MSC-CM抑制LPS誘導的NF-κB活化，降低NF-κB p65入核及磷酸化p65表達量，抑制下游炎性基因IL-1β和TNF-α的表達水平。另一方面MSC-CM增加了磷酸化STAT3蛋白表達水平。此外，STAT3信號抑制劑S3I-201，抑制了MSC-CM對巨噬細胞Arg-1基因表達的增強作用。 結論：小鼠骨髓MSCs能促進巨噬細胞由M1型向M2型轉化，同時增加RAW264.7細胞的增殖和遷移能力。MSCs對RAW264.7極化的調控作用是通過抑制巨噬細胞NF-κB p65 入核及活化STAT3信號通路實現的。本研究提出MSCs在體外可通過非直接接觸的方式影響巨噬細胞的極化表型和功能並初步探究了相關機制，為進一步研究MSCs抗炎和促修復損傷的機制提供一個新的思路。
