《YAP和TAZ調控人眼小梁細胞功能及相關信號通路的研究》是依託電子科技大學,由彭潔擔任醒目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：YAP和TAZ調控人眼小梁細胞功能及相關信號通路的研究
- 依託單位：電子科技大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：彭潔
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
青光眼是致盲的主要原因，迄今為止尚無有效的治癒手段。小梁網作為青光眼的主要病變部位，其上一些信號通路被發現可能成為青光眼治療中新的靶目標，我們發現這些通路中許多關鍵信號都跟YAP/TAZ相互調控。YAP/TAZ作為細胞外微環境動力轉導因子和共轉錄激活因子被關注，我們已經檢測到YAP/TAZ在人眼小梁細胞上存在，基於我們之前在小梁網信號通路、塑形及細胞外基質方面的研究，本課題中，我們擬將利用螢光標記、RT-PCR、western-blot和基因轉染等方法，檢測地塞米松及壓力條件下小梁細胞YAP/TAZ的變化；並外源性過表達或敲低YAP/TAZ，觀察對細胞外基質、肌動蛋白骨架及小梁細胞功能等方面的影響；觀察YAP/TAZ與部分青光眼治療通路上的關鍵因子的相互作用；檢測YAP/TAZ對小梁細胞旁細胞通透率的影響，探討YAP/TAZ在青光眼發生髮展中的作用，為發現青光眼治療的新的靶因子提供基礎。
結題摘要
青光眼是致盲的主要原因，迄今為止尚無有效的治癒手段。小梁網作為青光眼的主要病變部位，其上一些信號通路被發現可能成為青光眼治療中新的靶目標，我們發現這些通路中許多關鍵信號都跟YAP/TAZ 相互調控。YAP/TAZ 作為細胞外微環境動力轉導因子和共轉錄激活因子被關注，我們已經檢測到YAP/TAZ 在人眼小梁細胞上存在，基於我們之前在小梁網信號通路、塑形及細胞外基質方面的研究，本課題中，我們利用螢光標記、RT-PCR、western-blot 和基因轉染等方法，檢測YAP/TAZ在人眼小梁網和培養人眼小梁細胞的表達；地塞米松對人眼小梁細胞YAP/TAZ表達的影響；壓力對人眼小梁細胞YAP/TAZ的表達的影響；在地塞米松處理的條件下，過表達或敲低YAP/TAZ，western-bolt 觀察LPA 通路中的LPA、TGM2 通路中的TGM2、Wnt 通路中的β-catenin 及與調節組織再塑的CTGF 和TGF-β 的表達改變情況，根據它們相互調控的結果來了解它們在青光眼發生中的可能關係及治療意義；人眼小梁細胞體外濾膜培養及其通透阻力測定。結論：1.地塞米松誘導HTM細胞中YAP/TAZ的表達升高；2. YAP/TAZ調節肌動蛋白相關蛋白；3.YAP/TAZ誘導HTM細胞增殖；4.YAP/TAZ調節HTM細胞中CLAN的形成；5.YAP/TAZ調節HTM細胞的房水流出。科學意義：我們探索了HTM細胞中YAP/TAZ的信號轉導方式，以及其在HTM細胞的細胞骨架中的調節作用。在我們的研究中，我們觀察到隨著地塞米松劑量的增加，YAP的表達水平顯著增加，同時，細胞骨架受損。TAZ基因也與14-3-3σ蛋白結合，並且具有與YAP相同的轉錄激活功能。因此，根據地塞米松的劑量反應日期，TAZ的表達水平隨劑量的增加而升高。在本研究中，我們觀察到HTM細胞的增殖伴隨著與YAP/TAZ的敲低。在目前的研究中，通過敲低和過表達YAP和TAZ，我們分析纖連蛋白，層粘連蛋白，膠原I，膠原IV和β-連環蛋白的表達水平。我們還觀察地塞米松的處理後的HTM細胞骨架的細胞外基質和肌動蛋白微絲。至關重要的是，我們的研究可以逐步揭示YAP / TAZ信號通路在青光眼中的機制。同時，我們的研究探討了在青光眼中，動態轉導和共轉錄激活因子YAP / TAZ可能產生的影響，並解釋青光眼的發展和進展的新可能的機制。
