《MicroRNA-520b對肝癌的抑制作用及其分子機制研究》是依託南開大學，由張偉英擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：MicroRNA-520b對肝癌的抑制作用及其分子機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張偉英
- 依託單位：南開大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
申請者前期研究發現，microRNA-520b在肝癌細胞中表達下調，可明顯抑制肝癌細胞克隆形成，提示microRNA-520b可能作為抑癌microRNA發揮功能。已篩選到的靶基因有cyclinD1、MEKK2和MLK3，它們與細胞增殖轉化功能密切相關。本項目將在前期研究工作基礎上，進一步探討microRNA-520b對肝癌的抑制作用及其分子機制，主要研究內容：建立穩定表達microRNA-520b的肝癌細胞系，觀察其對裸鼠成瘤的抑制作用；進一步篩選靶基因，對其做進一步分析，通過免疫組化觀察靶基因在肝癌組織中的表達情況；對靶基因作用的分子機制進行深入研究，通過RNA干擾靶基因（或過表達）觀察其對肝癌生長抑制作用的影響，從而闡明microRNA-520b抑制肝癌細胞生長的作用途徑。本研究將為microRNA-520b作為抑癌microRNA提供實驗證據，有助於進一步豐富肝癌發生的分子機理。
結題摘要
MicroRNAs (miRNAs) 是一類長度在 19~24 個核苷酸(nt)的內源性非編碼單鏈小分子RNA。近年來研究發現，miRNAs在腫瘤的發生髮展中具有重要的作用，可作為癌基因或抑癌基因促進或抑制腫瘤的發生。本項目中，實時定量PCR方法發現，miR-520b在11例臨床肝癌標本中和4個肝癌細胞系 (HepG2, H7402, MHCC-97L, MHCC-97H) 中均呈低表達。套用克隆形成實驗、EdU增殖實驗和MTT實驗檢測結果顯示，miR-520b可以在體外抑制肝癌HepG2/H7402細胞的增殖。通過生物信息學分析發現，cyclin D1和MEKK2是miR-520b的兩個潛在的靶基因。利用報告基因和免疫印跡實驗檢測發現，miR-520b可以直接靶向cyclin D1和MEKK2的3′UTR區域，並抑制其翻譯。EdU增殖實驗和MTT實驗檢測結果顯示，cyclin D1和MEKK2具有促進肝癌HepG2/H7402細胞增殖的作用。此外，裸鼠成瘤實驗結果顯示，miR-520b在體內具有抑制肝癌HepG2細胞生長的作用。上述結果表明，miR-520b可以通過靶向cyclin D1和MEKK2發揮抑制肝癌細胞生長的作用，提示miR-520b可能是一個抑癌的miRNA。miR-520b在肝癌的診斷和治療中具有套用價值。
