《MGr1-Ag誘導EMT在缺氧條件下促進肺癌侵襲的機制研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由劉理禮擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：MGr1-Ag誘導EMT在缺氧條件下促進肺癌侵襲的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：劉理禮
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤侵襲和轉移是患者預後不良的最主要因素之一，缺氧在腫瘤侵襲和轉移過程中發揮的作用日益受到重視。申請者在前期國科金資助下發現了一個新的缺氧反應分子-MGr1-Ag，後續的研究證實該分子能夠促進肺癌細胞的侵襲和轉移，但其機制尚不清楚。近年來，EMT在肺癌侵襲和轉移中的作用備受關注，我們前期的結果提示：外源性高表達MGr1-Ag能夠促進肺癌細胞EMT 的發生，而抑制MGr1-Ag的表達能夠逆轉缺氧誘導的肺癌細胞EMT的發生。提示：MGr1-Ag是缺氧誘導肺癌細胞發生EMT的新分子。但MGr1-Ag在缺氧誘導EMT中的信號通路和分子機制尚不清楚。本課題擬採用siRNA干涉、報告基因、Western Blot、染色質免疫共沉澱等方法探討缺氧條件下MGr1-Ag促進EMT的機制以及EMT在肺癌侵襲和轉移中的機制，為靶向治療肺癌提供新的理論依據。
結題摘要
為了證實MGr1-Ag/67LR在肺癌骨轉移中的作用，首先構建了的MGr1-Ag的高表達和低表達細胞系，我們利用體外模擬體內骨微環境的骨片粘附試驗以及尾靜脈骨轉移瘤模型證實了MGr1-Ag/67LR是肺癌轉移相關的新分子，並通過EMT機制促進了肺癌骨轉移的發生。 為了探討缺氧活化的信號通路以及對MGr1-Ag的影響，首先我們檢測了常氧條件和缺氧條件下MAPK/JNK信號的表達變化，結果顯示，隨缺氧時間的不斷延長，MAPK信號通路中的p-38MAPK、ERK和JNK蛋白的磷酸化水平不斷升高，且呈時間依賴性。 進而，為了明確這條信號通路與缺氧誘導MGr1-Ag/37LRP的相關性，我們使用了不同劑量的38MAPK、ERK和JNK的特異性抑制劑SB203580、U0126和SP600125分別處理細胞後對MGr1-Ag的影響，結果發現，SP600125和U0126能夠明顯抑制缺氧狀態下肺癌細胞A549中MGr1-Ag/37LRP的mRNA水平、蛋白水平和轉錄活性，而SB203580處理細胞後對MGr1-Ag無影響。為了進一步探討MAPK激酶下游轉錄因子c-jun的活化參與了缺氧誘導的MGr1-Ag的表達，我們構建了c-jun的siRNA，轉染入肺癌細胞A549後，經缺氧條件處理後，抑制c-jun的表達後，缺氧誘導的MGr1-Ag 的蛋白表達、mRNA水平和轉錄活性均受到抑制。 為明確MGr1-Ag啟動子上游546bp中AP-1關鍵的結合位點，首先，針對雙螢光素酶篩選的MGr1-Ag啟動子中包含AP-1 結合位點的啟動子序列進行分析，設計了包含該結合位點的上下游引物，利用染色質免疫共沉澱的方法（包含-271的結合位點）擴增出約200bp的陽性條帶。提示MGr1-Ag啟動子上的AP-1的結合位點存在於該區域中。進而，通過雙螢光素酶報告基因系統和凝膠遷移率的方法明確了在MGr1-Ag啟動子轉錄起始位點的-423 to +123的546bp存在潛在的AP-1的結合位點。 最後，使用MGr1-AgsiRNA、中和抗體以及MAPK激酶阻斷試驗針對缺氧和常氧條件下肺癌細胞的體外侵襲能力進行了研究。體外侵襲實驗的結果提示，缺氧有促進肺癌細胞侵襲入細胞外基質的能力，而抑制MGr1-Ag、ERK或JNK後MEK均能夠減少缺氧誘導的侵襲。
