p300調控Skp2誘導EMT促進非小細胞肺癌遠處轉移的作用及機制

《p300調控Skp2誘導EMT促進非小細胞肺癌遠處轉移的作用及機制》是依託中山大學，由侯雪擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：p300調控Skp2誘導EMT促進非小細胞肺癌遠處轉移的作用及機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：侯雪
• 依託單位：中山大學

中文摘要

遠處轉移是NSCLC致死的主要原因，但其分子機制仍待深入研究。P300是一種組蛋白乙醯基轉移酶，通過調控轉錄因子參與惡性腫瘤的發生髮展。我們的前期研究發現p300表達與NSCLC遠處轉移相關，體外也證實p300高表達促進NSCLC細胞的遷移和侵襲能力，並發現p300能誘導NSCLC細胞發生EMT。進而我們還發現p300可調控NSCLC細胞Skp2的表達，且已有文獻顯示Skp2可降解E-cadherin。而E-cadherin下調是EMT的分子表型。由此我們提出：p300可能通過調控Skp2誘導EMT促進NSCLC遠處轉移。本項目將套用最新的體外培養系統和分子生物學手段，結合小鼠原位移植瘤模型，獲得p300高表達誘導EMT促進NSCLC遠處轉移的可靠證據，尋找並證實此過程中p300直接作用的分子和信號通路，闡明p300促進NSCLC遠處轉移的機制，為研發NSCLC靶向治療藥物提供新的思路。

結題摘要

組蛋白乙醯基轉移酶（HAT）p300是一種轉錄共活化因子，參與協調和整合多個細胞信號與轉錄複合物形成，使細胞增殖、分化、凋亡等相關基因活性在各種生理及病理刺激下保持適當水平。近年的研究發現p300能促進惡性腫瘤的發生和發展，其高表達是多種惡性腫瘤預後不良的重要因素。本研究將探討p300在非小細胞肺癌（NSCLC）侵襲性發展過程中的生物學功能及分子作用機制。用攜帶p300 shRNA及對照序列慢病毒感染H1975、H1993細胞，構建p300敲降表達細胞株H1975/shP300、H1993/shP300。將攜帶p300基因序列的質粒P300-pcDNA3.1-EGFP和空載體質粒瞬時轉染入H460細胞，構建了外源性過表達p300的細胞株H460/p300。用細胞增殖實驗和克隆形成實驗檢測H1975/shP300、H1993/shP300、H460/p300和對照細胞的增殖能力。採用劃痕實驗和侵襲小室實驗檢測幾對細胞的遷移和侵襲能力。在功能研究的基礎上，檢測上皮-間質轉化相關蛋白的表達在p300敲降表達細胞和過表達細胞的改變，探索上皮-間質轉化是否是p300促進非小細胞肺癌侵襲性發展的機制。細胞增殖實驗的結果顯示，H1975/shP300、H1993/shP300的細胞增殖能力較H1975/ctrl、H1993/ctrl明顯下降，在軟瓊脂中形成的克隆數目明顯減少；而H460/p300細胞的增殖能力較H460/ctrl明顯提高。在細胞遷移、侵襲實驗中，H1975/shP300、H1993/shP300在劃痕損傷修復中的癒合速度減慢，在Transwell小室穿透Matrigel膜的能力也較H1975/ctrl、H1993/ctrl減弱；而H460/p300細胞顯示較H460/ctrl升高的遷移和侵襲能力。在功能研究的基礎上進一步發現，p300敲降表達的細胞H1975/shP300、H1993/shP300中上皮表型的標誌物E-cadherin表達升高，間質表型的相關標誌物Vimentin, Fibronectin, snail表達下降；而在p300過表達細胞H460/p300卻呈上皮標誌物表達減弱，間質標誌物表達增強。研究證實p300表達促進了非小細胞肺癌增殖、遷移和侵襲能力的升高。上皮-間質轉化是p300促進肺癌侵襲性發展的機制。