《Lgr5促進肝癌細胞上皮間質轉化的分子機制》是依託武漢大學，由劉志蘇擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Lgr5促進肝癌細胞上皮間質轉化的分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：劉志蘇
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝癌的侵襲轉移和術後復發是肝癌患者死亡的主要原因。上皮-間質轉化(EMT)與肝癌復發及轉移密切相關, 已成為當前生命科學研究的熱點。多種信號轉導通路參與了腫瘤細胞的EMT過程,其中Wnt/β-catenin信號通路尤為引起人們的關注。作為Wnt 信號通路的重要靶基因，G-蛋白偶聯受體5(Lgr5)，在體內細胞信號轉導和代謝調節等方面發揮著重要作用。我們前期工作提示，LGR5可能是通過Wnt/β-catenin信號傳導通路介導原發性肝癌的上皮間質轉化。為探求其具體分子機制，我們將從表觀遺傳的角度探討研究Lgr5基因的表達調控機制；運用蛋白組學技術篩選與Lgr5相關的侵襲轉移蛋白；並將重點研究Lgr5對β-catenin的表達調控機制；最後採用酵母雙雜交鑑定Lgr5與靶蛋白相互作用結構域。以其明確Lgr5在肝癌細胞侵襲轉移過程中是否起關鍵作用，為肝癌治療提供新的靶位點。
結題摘要
上皮–間質轉化(EMT)與肝腫瘤復發及轉移密切相關,多種信號轉導通路參與了肝腫瘤細胞的EMT過程,其中Wnt/β-catenin信號通路發揮重要作用。作為Wnt 信號通路的重要靶基因，富含亮氨酸重複序列G-蛋白偶聯受體5(Lgr5)功能涉及體內細胞信號轉導和代謝調節等方面。本課題發現Lgr5的高表達與腫瘤大小、 腫瘤數量、巴塞隆納分期以及門靜脈癌栓呈正相關。多因素分析提示Lgr5的高表達是肝癌患者預後不良的獨立危險因素。肝癌細胞的侵襲轉移過程中存在明顯的EMT現象。Lgr5發揮促癌作用與原發性肝癌侵襲轉移過程中EMT有關，機制是通過Wnt/β-catenin信號傳導通路介導原發性肝癌EMT的發生。進一步分析顯示Lgr5促進了肝癌細胞對阿黴素的耐藥性。PDCD5作為Lgr5的靶分子在介導阿黴素耐藥過程中發揮作用，過表達PDCD5可以明顯提高肝癌細胞對阿黴素的敏感性。PDCD5能抑制Lgr5介導的對阿黴素的耐藥。PDCD5以及敲除Lgr5後克隆形成實驗，驗證PDCD5對提高肝癌細胞阿黴素敏感性的作用。機制研究提示，Lgr5可以通過結合PDCD5以阻止其入核來影響p53的穩定性並促進其降解。更重要的是，Lgr5可以抑制阿黴素介導的通過p53途徑的凋亡以及降低對阿黴素的敏感性。另外，我們發現長鏈非編碼RNA：SNHG6可以發揮促肝癌生長作用。機制上，SNHG6可以作為ceRNA通過競爭性結合miR-101-3p上調ZEB1的表達，誘導EMT的發生，促進HCC的侵襲轉移。SNHG6可以作為抗HCC侵襲、轉移治療的潛在靶點。本課題在肝癌組織小RNA測序中發現一個新的miRNA,來源於假基因MTCO3P38，暫命名為miR-MTCO3P38，長度為18nt,經過RNA二級結構預測、PCR產物二代測序與northern blot等試驗驗證其的確穩定表達於肝組織和肝細胞系中。功能上miR-MTCO3P38主要抑制肝癌細胞的侵襲遷移行為。機制方面，miR-MTCO3P38主要通過靶基因TMOD1發揮作用。
