《CREPT調控NF-kB信號通路在結腸癌發生中的分子機制》是依託清華大學，由任芳麗擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：CREPT調控NF-kB信號通路在結腸癌發生中的分子機制
- 依託單位：清華大學
- 項目負責人：任芳麗
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
NF- kB信號通路在生物體內的生理和病理過程中發揮著重要的作用。CREPT蛋白是一個重要的促進癌細胞生長相關蛋白，在許多種的腫瘤中都呈現異常的高表達。本課題在發現CREPT蛋白與RelA相互作用的基礎上，研究CREPT調控NF- kB信號通路在結腸癌發生中的分子機理，同時發現CREPT蛋白的磷酸化修飾在此過程中起了重要的作用，本課題將深入研究CREPT的磷酸化修飾在該過程中如何發揮功能去調控RelA蛋白的活性，進而影響NF- kB信號通路。另外，鑑定CREPT上磷酸化修飾的關鍵胺基酸基序，進一步探索調節CREPT磷酸化修飾的關鍵蛋白激酶。在此基礎上明確CREPT磷酸化修飾在NF-kB介導的結腸癌發生中的作用機制。
結題摘要
NF-kB信號通路在生物體的生理和病理過程中發揮著重要的作用，CREPT 也參與了生物體的生理和病理過程，尤其是在多種人類腫瘤中高表達。本課題在發現CREPT 蛋白與RelA相互作用的基礎上，研究CREPT調控NF- kB信號通路在結腸癌發生中的分子機理。首先，通過免疫共沉澱實驗和Pull-down實驗驗證CREPT與RelA相互作用，該相互作用依賴於TNF-a的刺激。並進一步進行了內源性的相互作用，證實這種相互作用在細胞中和組織中是真實存在的。利用免疫螢光實驗發現，在有TNF-a存在的情況下，發現CREPT蛋白與RelA蛋白存在共定位於細胞核中。CREPT蛋白對p-p65的磷酸化水平也有影響，可以促進RelA的磷酸化，同時發現，CREPT蛋白影響RelA/P50符合物形成。基於CREPT蛋白既沒有激酶活性也沒有磷酸酶活性，所以CREPT蛋白調控RelA的磷酸化肯定是通過其它激酶或者磷酸酶發揮了調控作用。通過網上預測及分析，我們發現CREPT蛋白可以作為激酶CDK6和Aurora B的底物之一。進一步通過免疫共沉澱實驗和磷酸化實驗發現，CDK6和Aurora B與CREPT之間存在相互作用，而且Aurora B與CDK6可以調控CREPT蛋白的磷酸化水平。磷酸化實驗證明，CREPT蛋白的磷酸化可以被通用的磷酸酶lamda-ppase去磷酸化。同時通過網路軟體分析，預測到幾個位點，設計構建了不同的點突變後，我們找到了CREPT蛋白的S134和S145位點分別是CDK6和Aurora B作用的關鍵位點。進一步實驗發現，激酶Aurora B 和CREPT相互作用可以協同調控 Cyclin B1 而調控細胞周期。通過細胞增殖實驗等發現，該位點對於CREPT蛋白發揮作用十分重要。CREPT與RelA在多種腫瘤中存在著顯著的正相關。CREPT敲除小鼠對於DSS誘導的腸炎更加敏感，我們推測，CREPT很可能通過調控NF-κB信號通路參與到腸上皮細胞的增殖和修復過程中。綜上，我們首次發現 CREPT 是一個在真核細胞中存在磷酸化活性的蛋白，提出了 CREPT 參與到 DNA 損傷修復，導致腫瘤細胞突變積累，影響癌細胞中 Aurora B 協同 CREPT 調控 Cyclin B1 的表達；同時通過調控NF-κB信號通路參與腸炎/腸癌的發生髮展；為將來治療癌症提供了新的參考。
