《RBBP6調控NF-κB促進結腸癌細胞EMT的作用及機制研究》是依託上海交通大學，由王曉亮擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：RBBP6調控NF-κB促進結腸癌細胞EMT的作用及機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：王曉亮
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
課題組前期通過基因晶片、QPCR和組織晶片發現RBBP6與結腸癌轉移相關。上皮間質轉化(EMT)是癌轉移的關鍵步驟，E-cad丟失是其重要標誌。我們在RBBP6高表達組織中觀察到E-cad丟失，提示RBBP6參與EMT發生。泛素化作用激活NF-κB是調控EMT的重要途徑；我們沉默泛素化酶RBBP6後NF-κB亞單位p65入核減少，而RBBP6高表達組織中p65上調。據此分析：RBBP6通過泛素化激活NF-κB促進EMT進而誘發癌轉移，結腸癌轉移可能存在RBBP6-NF-κB-EMT信號途徑，有待進一步證實。本課題通過①基因沉默和過表達觀察RBBP6在結腸癌轉移中的作宙趨蒸員用；②標誌物檢測驗證RBBP6是否參與EMT；③免疫沉澱和雷射共聚焦探討RBBP6調控NF-κB的作用位點；④蛋白酶阻滯劑MG132進行干預研究。可望闡明RBBP6調控NF-κB促進EMT的分子朽己刪機制，為結腸癌防治提供潛在靶點。
結題摘要
背景與目的：轉移是結腸癌治療失敗的重要原因之一。本課題在前期基礎上，研究RBBP6對結腸癌轉移的影響，並揭示RBBP6促進轉移的新機制，進而豐富結腸癌轉移基因調控網路，永良盼為結腸癌治療提供潛在靶點。 實驗方法：本課題從體內、體外兩個方面，分子、細胞、動物及人體四個層面展開研究。構建RBBP6敲減和過表達穩定細胞株，利用CCK-8實驗、細胞劃痕、Transwell實驗等檢測RBBP6表達變化對細胞增殖和侵襲能力的影響；構建裸鼠皮下成瘤模型和肝肺轉移模型，檢測RBBP6表達變化對細胞體內轉移能力的影響；利用免疫組織化學染色法檢測並統計分析在結腸癌組織中，挨紋RBBP6表達水平與結腸癌患者臨床病理特徵和預後相關性，以及E-cadherin、N-cadherin、p-p65的表達水平與RBBP6的相關性；利用免疫共沉澱和泛素化實驗，闡明RBBP6調控NF-κB通路，促進結腸癌細胞EMT的分子機制。 實驗結果：細胞劃痕、Transwell等實驗表明：RBBP6過表達後，結腸癌細胞的侵襲遷移能力增強，相反，RBBP6敲減後，細胞的侵襲遷移能力減弱；動物實驗表明：RBBP6過表達促進癌細胞在體內轉移，而敲減後，細胞轉移能力下降；免疫組化結果顯示：與癌旁組織相比，RBBP6在結腸癌組織中的陽性表達率顯著高於癌旁組織，差異有統計學意義（P ＜ 0.01）。RBBP6的表達水平與腫瘤分期，分化程度，遠處轉移相關。COX回歸模型顯示，RBBP6是獨立預後因素（P = 0.012）；在結腸癌組織中，上皮標誌物E-cadherin的表達與RBBP6的表達呈負相關，而NF-κB信號通路標誌物p-p65、間質標誌物N-cadherin的表達與RBBP6的表達呈正相關；免疫共沉澱等實驗表明：RBBP6能結合IκBα，並促進其泛素化降解，從而激活NF-κB通路，促進結腸癌細胞EMT。 結論和意義：RBBP6可增強結腸癌細胞的侵襲和遷移能力；RBBP6在結腸癌組織中的表達水平升高，並且與EMT過程有關；RBBP6激活NF-κB信號通路，促進細胞EMT, 進而促進結腸癌的侵襲和轉移。我們的研究結果表明，RBBP6在結直腸癌發生髮套艱剃展中起著舉足輕重的作用，地贈虹它可作為結腸癌預後的標誌物，並有望成為結直腸灶堡背兆癌侵襲和轉移治療的潛在靶點。研究成果發表在Cancer science等雜誌。
