《IL-1β通過NF-κB/Lipocalin2調控大腸癌上皮間質轉化的機制研究》是依託浙江大學，由徐芳英擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：IL-1β通過NF-κB/Lipocalin2調控大腸癌上皮間質轉化的機制研究
- 依託單位：浙江大學
- 項目負責人：徐芳英
- 項目類別：面上項目
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
轉移是大腸癌患者死亡的最主要原因，上皮間質轉化（EMT）是轉移發生的重要機制，涉及多種分子和信號通路。炎症因子IL-1β主要是由單核巨噬細胞或內皮細胞分泌產生，可以通過激活腫瘤細胞內的NF-κB上調Lipocalin2（LCN2）的表達。前期實驗結果初步發現在大腸癌中，IL-1β可以激活NF-κB、抑制E-cadherin表達、上調Snail，還能促進LCN2表達；NF-κB可以促進EMT，LCN2卻抑制EMT。因此本課題擬通過體外細胞系實驗、體內動物實驗及人體組織樣本檢測，明確IL-1β是否可以通過激活NF-κB來促進EMT，其上調的LCN2是否能抑制IL-1β/NF-κB引起的EMT，形成負反饋性調控。從而為闡明炎症微環境與腫瘤轉移之間的調控機制提供新思路。
結題摘要
我們的課題原定是用IL-1β刺激建立細胞模型，在進行過程中將其前延，改為用LPS刺激建立細胞模型。研究結果如下。 我們在結腸癌細胞系DLD1和RKO中用1μg/mlLPS處理24小時，可以明顯誘導細胞炎症小體的活化。Transwell遷移和侵襲實驗表明，LPS可以明顯促進腫瘤細胞的遷移和侵襲能力，此作用可以被Caspase1抑制劑Ac-YVAD-CHO抑制，提示LPS通過誘導炎症小體活化以促進細胞的遷移和侵襲。 同時，LPS可以明顯上調磷酸化P65的表達及入核，小干擾RNA敲降P65後LPS不再發揮其活化炎症小體的效應，表明LPS通過調控NF-kB/P65活化以促進炎症小體的活化。 進一步發現LPS可以明顯上調Snail蛋白表達量並促進其入核；而當敲降P65之後，LPS不再發揮其上調Snail表達並促進Snail入核的作用，這表明NF-kB/P65在LPS調控Snail表達過程中發揮重要作用。當敲降Snail之後，LPS不再促進侵襲與遷移。這說明，Snail在LPS促進細胞遷移和侵襲過程中發揮重要作用。 以不同葡萄糖濃度（0、5、10、15mM）培養細胞並進行細胞遷移與侵襲實驗，發現在無糖（0mM）培養條件下，LPS對結直腸癌RKO和DLD1細胞系的運動能力無影響，而在葡萄糖濃度為5、10、15mM的細胞培養條件下，LPS可以明顯增強細胞的運動能力。並且LPS可以明顯促進細胞的葡萄糖消耗以及乳酸產生；當敲降Snail之後，LPS不再影響細胞糖酵解水平。 LPS對HK1、HK2、PFKP、PKM2這4種糖酵解限速酶的表達無明顯影響，卻明顯上調HK3的表達。在抑制NF-kB/P65入核或敲降Snail表達之後，LPS不再發揮其上調HK3表達的作用。我們構建了含HK3啟動子區段的螢光素酶報告基因載體，結果表明，LPS可上調HK3啟動子活性，抑制NF-kB/P65入核或敲降Snail表達之後，LPS不再上調HK3啟動子活性。同時，免疫共沉澱結果發現LPS可以促進NF-kB/P65與Snail形成蛋白複合體，細胞免疫螢光結果發現此蛋白複合體定位在細胞核內。 利用實驗室已有的78例結直腸癌組織cDNA樣本，檢測各基因的RNA表達水平，結果表明Caspase1與P65，NF-kB/P65與Snail，NF-kB/P65與HK3，Snail與HK3表達均呈明顯正相關。 因此我們認為
