B7-H4在胰腺癌免疫逃逸中的作用及機制研究

《B7-H4在胰腺癌免疫逃逸中的作用及機制研究》是依託浙江大學，由姚航平擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：B7-H4在胰腺癌免疫逃逸中的作用及機制研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：姚航平
• 項目類別：面上項目

項目摘要

胰腺癌是一種起病隱匿、生長迅速並以早期轉移為特徵的消化系統惡性腫瘤，死亡率高，其病因及發病機理尚未明了。B7-H4是最近發現的協同刺激因子B7家族新成員，具有抑制T細胞免疫應答的功能。已有研究顯示，B7-H4在多種腫瘤組織中有異常表達，提示B7-H4參與這些腫瘤的形成和發展。B7-H4在胰腺癌病理過程中的作用及其介導腫瘤的免疫逃逸機制尚未有系統研究。本項目擬採用高密度組織晶片和基因晶片等技術分析臨床胰腺癌病理樣本中B7-H4的表達，利用特異性基因表達調控技術研究B7-H4對DC和T細胞表型及免疫功能的影響，採用功能性研究手段結合動物實驗探討B7-H4對胰腺癌細胞腫瘤生物學行為的改變，目的是闡明：①B7-H4在胰腺癌病理過程中的表達特徵；②B7-H4介導胰腺癌免疫逃逸中的作用和分子機制。本項目的實施，對於闡明胰腺癌的發病機理，尋找新的胰腺癌治療的靶分子和手段，具有重要的理論和實際意義。

結題摘要

背景：B7-H4在一些腫瘤組織上高表達，並負向調節T細胞的免疫應答。然而，除介導T細胞免疫抑制外，B7-H4在全身各種組織的表達情況、B7-H4在腫瘤中的異常表達是否直接影響腫瘤細胞的致瘤性及生物學活性、是否影響細胞的癌性信號途徑分子來調控腫瘤細胞的生長和存活，並由此介導腫瘤免疫逃逸。這些B7-H4參與在腫瘤發病機理中的作用，至今未有明確結論。 方向：本研究自行製備了小鼠抗B7-H4單克隆抗體，在該單克隆抗體的基礎上研究了B7-H4在多種組織（包括正常組織與相應的腫瘤組織）中的表達特徵，並初步探討了B7-H4對腫瘤微環境中淋巴細胞和DC功能的影響，著重分析B7-H4對胰腺癌細胞的致瘤性生物學行為及癌細胞凋亡的影響，並分析其可能的分子機制。 重要結果：①獲得針對B7-H4的鼠源單克隆抗體：特異性抗B7-H4的單抗4H8能用於直接ELISA、免疫共沉澱、流式細胞術及免疫組化染色等方法檢測組織及細胞中的B7-H4表達。②明確B7-H4在不同腫瘤病理組織中的表達特徵：B7-H4在子宮、卵巢、乳腺及大腸來源腫瘤中的表達顯著高於這些部位的正常組織，並且B7-H4的表達水平與腫瘤的病理分級相關。但在胃和肝臟來源的腫瘤及正常組織中B7-H4的表達無明顯差異。③設計的3條siRNA均能有效抑制L3.6p1胰腺癌細胞的B7-H4表達，其中siRNA-2的抑制效率最高，選擇其做以下功能性實驗。④經siRNA-2轉染後B7-H4表達沉默的L3.6p1細胞，其增殖、克隆形成、劃痕遷移等能力明顯降低，腫瘤細胞凋亡增加，裸鼠皮下腫瘤生長明顯抑制。同時，B7-H4表達沉默後的L3.6p1細胞在體內外實驗中均顯示Caspases活性增加及Erk1/2磷酸化水平降低。⑤B7-H4表達沉默後的L3.6p1細胞分別與脾淋巴細胞和DC共培養，均未能發現各項細胞免疫指標的明顯變化。 科學意義：B7-H4在不同腫瘤組織的異常表達及其與腫瘤病理分級的相關性，提示B7-H4可能參與多種腫瘤發生髮展的病理過程。胰腺癌細胞靶向B7-H4表達抑制可誘導caspases活性、抑制Erk1/2磷酸化，進而促進腫瘤細胞凋亡、抑制腫瘤生長及致瘤性生物學行為。本項目研究提示B7-H4的異常表達可能促進腫瘤生長，並可能成為腫瘤治療的潛在靶點。靶向B7-H4表達抑制技術可以有效抑制腫瘤的病理進展。