3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD,E.C.1.1.1.50)是睪酮假單胞菌分泌的多種類固醇脫氫酶的一種。
基本介紹
- 中文名：3-α羥基類固醇脫氫酶
- 外文名：HSD
- CAS號：9028-56-2
- 儲存條件：2-8°C
- 價格：1元/mg
- PH穩定性：4.5～10.5
- 最佳PH：10.5
- 最佳溫度：60℃
簡介,套用,
簡介
3α-羥類固醇脫氫酶(3α-HSD,E.C.1.1.1.50)是睪酮假單胞菌分泌的多種類固醇脫氫酶的一種,可作用於多種類固醇基質,可逆地催化C<,19-27>類固醇3位羥基/酮基的氧化還原<'[1]> .膽汁酸是3α-HSD的作用底物之一,臨床上用3α-HSD作為工具酶來測定人血清中的總膽汁酸(TBA)濃度.目前,TBA測定中所用的工具酶3α-HSD均從睪酮假單胞菌直接提取而來.天然3α-HSD提取工藝複雜,為了和其它蛋白相分離,需經過多步層析和製備性等電聚焦電泳技術來純化<'[2]>,步驟繁瑣,純化過程中伴有酶活性的丟失,酶蛋白的得率低,並且3α-HSD與β-HSD也難以分離,這使得直接從細菌中分離的天然3α-HSD價格昂貴,在一定程度上限制了TBA測定的臨床推廣.因此,研究以pET15b質粒為載體建立了3α-HSD的原核表達系統,並成功地表達了融合蛋白.利用pET15b質粒編碼重組蛋白N端的His標籤經Ni-Sepharose柱進行親和層析,所得樣品中3α-HSD的純度較高,在SDS-PAGE上呈現單一的條帶,回收率達68%.這為血清TBA酶循環法測定的建立奠定了基礎.
套用
睪酮假單胞菌—3α羥類固醇脫氫酶及其在總膽汁酸測定中的套用（睪酮假單胞菌(comamonas pseudomonas testosteroni,CPT)是一種需氧、非發酵的革蘭氏陰性菌.它可產生多種類固醇脫氫酶,其中之一是3α-羥類固醇脫氫酶(3α-hydroxysteroid dehydrogenase,3α-HSD).3α-HSD可作用於多種基質,可逆地催化C19～27類固醇3位羥基/酮基的氧化還原反應.1956年,Talalay等首先證實3α-HSD是類固醇代謝途徑中最初的酶之一,以後陸續從多種原核及真核細胞中發現了3α-HSD）
