基本介紹
- 中文名:重組子篩選
- 出處:《土壤學大辭典》
重組子篩選,是指將通過重組產生的不同於親本基因型的個體或組織即重組子,通過轉化、轉染等導入方式導入受體細胞,經過培養得到大量所需轉化子菌落或轉染噬菌斑,進而將重組體的轉化子細胞或轉染噬菌體從其他細胞群體中分離出來,鑑定該...
藍白斑篩選是重組子篩選的一種方法,是根據載體的遺傳特徵篩選重組子,主要為α-互補與抗生素基因。藍白斑篩選在指示培養基上,未轉化質粒的菌落因無抗生素抗性而不能生長,重組質粒的菌落是白色的,非重組質粒的菌落是藍色的,以顏色不同為依據直接篩選重組克隆的方法。原理 一些載體(如PUC系列質粒)帶有β-半乳糖苷...
篩選 根據載體的遺傳特徵篩選重組子,如α-互補、抗生素基因等。至今使用的許多載體都帶有一個大腸桿菌的DNA的短區段,其中有β-半乳糖苷酶基因(lacZ)的調控序列和前146個胺基酸的編碼信息。在這個編碼區中插入了一個多克隆位點(MCS),它並不破壞讀框,但可使少數幾個胺基酸插入到β- 半乳糖苷酶的氨基端而不...
重組克隆篩選方法是從經過轉化、轉染或轉導處理所得的細菌群體中篩選出含有目的基因的重組體的方法。DNA體外重組的目的是要得到所需的重組克隆,因此重組克隆的篩選是至關重要的一步。篩選法可分為兩大類。一是利用遺傳學方法,藉助選擇表型的直接篩選法,其中包括插入失活法,即通過外源DNA插入到質粒載體的抗藥性基因...
鳥槍法(Shot gun)是一種直接從生物細胞基因組中獲取目的基因的方法。鳥槍法將某種生物體的全基因組或單一染色體切成大小適宜的DNA片段,分別連線到載體DNA上,轉化受體細胞,形成一套重組克隆,從中篩選出含目的基因的目的重組子。此法操作簡單,但工作量大。簡介 鳥槍法是直接從生物細胞基因組中獲取目的基因最常用的...
重組子的篩選 從不同的重組DNA分子獲得的轉化子中鑑定出含有目的基因的轉化子即陽性克隆的過程就是篩選。發展起來的成熟篩選方法如下:(一)插入失活法 外源DNA片段插入到位於篩選標記基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位點後,會造成標記基因失活,表現出轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變,...
亞克隆:(subclone) 分為細胞克隆和分子克隆。從一個克隆的DNA片段上分割幾個區域,分別將之克隆到新的載體上,獲得一系列新的重組子。在細胞克隆中,對培養的細胞來說,從原有的克隆中,再篩選出具有某種特性的細胞進行培養,就是亞克隆。在分子克隆中,從大片段的克隆中選取特定小片段再克隆。亞克隆就是初步...
《基因工程原理與實驗》是2020年中國農業大學出版社出版的圖書。內容簡介 本書包括基因工程原理篇和基因工程實驗篇兩部分內容。基因工程原理篇闡述了基因工程原理與技術,其內容包括緒論、基因工程的工具酶和基因工程載體、DNA的連線、轉化和重組子篩選等基因工程相關的基本原理和新發展以及基因工程技術與方法、基因工程在...
《醫用基因工程(2版)》是作者在多年從事基因工程的教學和科研的基礎上,通過不斷總結、充實、修改後編寫而成的。《醫用基因工程(2版)》在全面論述基因和基因工程基本概念的基礎上,系統地闡述了有關基因克隆分離、鑑定;基因重組的常用工具酶、載體以及重組技術;詳細地介紹了重組子的篩選、分離及鑑定方法;著重論述...
第七節 重組子篩選 第十三章 探針製備 第一節 探針標記法 第二節 隨機引物法 第三節 末端標記法 第四節 探針純化 第十四章 PCR產物克隆 第一節 PCR產物重組策略 第二節 PCR產物的純化 第三節 末端平齊 第四節 TA克隆 第五節 添加限制性內切核酸酶識別序列 第十五章 PCR套用 第一節 菌落PCR 第二節 ...
《基因工程學》是化學工業出版社出版圖書。內容簡介 《基因工程學》全書共12章,除第1章緒論外,其餘各章主要闡述基因、工具酶、載體、重組DNA分子的轉化與重組子篩選、核酸的分離純化與目的基因的克隆、大腸桿菌基因工程、酵母菌基因工程、基因組、蛋白質工程、途徑工程和合成生物學等內容。本書的特色:①以實際操作...
四宿主和重組子篩選 五產物的高效表達 第三節基因工程藥物的生產 一發酵生產 二提純和復性 參考文獻 第五章疫苗技術 第一節疫苗的作用機制和種類 第二節疫苗製備技術 一活體疫苗製備 二滅活疫苗和亞單位製備 三核酸疫苗製備 四重組載體 五疫苗佐劑 第三節幾種重要疾病疫苗的研究進展 一愛滋病疫苗 二結核菌疫苗 ...
外源DNA片段插入到位於篩選標記基因(抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因)的多克隆位點後,會造成標記基因失活,表現出轉化子相應的抗生素抗性消失或轉化子顏色改變,通過這些可以初步鑑定出轉化子是重組子或非重組子。常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍白篩選法。1.抗性基因插入失活篩選法 根據抗生素抗性基因插入失活...
按照基因工程的技術路線,對基因工程的基本技術、基因工程工具酶、基因克隆載體、目的基因的獲取與改造、目的基因的分離與克隆、DNA重組與重組子篩選、外源目的基因表達與調控等進行了詳細的描述同時,根據基因工程的發展趨勢,對基因組改造、基因工程套用等進行了簡要的介紹。《基因工程/普通高等院校精品規劃系列教材》堅持...
《基因工程原理與套用》是2004年1月中國農業出版社出版的圖書,作者是陳宏。內容簡介 本書共16章,可分為4大塊,第一部分是基因工程的基本原理和操作步驟,包括第二章(基因工程工具酶)、第三章(基因工程載體)、第六章(基因組文庫的構建與目的基因的獲得)、第七章(DNA體外重組與基因轉移)、第八章(重組子的篩選與...
一、基因工程工具酶 二、基因克隆常用載體 第二節 基因克隆與重組子的鑑定 一、目的基因的獲得 二、插入特定DNA片段到載體 三、重組DNA導入宿主細胞 四、重組子的篩選與鑑定 第三節 基因工程的套用 一、植物轉基因技術及套用 二、動物轉基因技術及套用 三、基因工程藥物與基因治療 參考文獻 ...
2. 2 重組蛋白的表達系統 第三章 重組藥用蛋白的生產 3. 1 轉基因載體 3. 2 重組蛋白的生產流程 第四章 藥用蛋白編碼基因的獲得與克隆化 4. 1 T-A連線克隆基因 4. 2 酶切連線克隆基因 4. 3 無縫克隆目的基因 第五章 重組子篩選與鑑定 5. 1 感受態細胞製備 5. 2 質粒DNA轉化大腸桿菌感受態細胞 5....
上述方法都各有其優缺點,必須根據原材料及要達到的目的,選擇適當的一種或多種方法組合來達到研究目的。此外,其它方法還很多,如微切割和微克隆法、減法cDNA雜交法、重組篩選法等。全長及功能分析 獲得了眾多的候選cDNA後,通過篩選cDNA文庫或RACE等方法克隆全長基因。為確定其中的致病基因,需要逐個檢測它們在患病...
第四節重組體DNA分子的構建及導入受體細胞 一、外源DNA片段同載體分子的重組 二、基因工程中常用的宿主系統 三、重組體DNA分子導入受體細胞的途徑 四、影響外源基因表達的因素 第五節重組子的篩選 一、遺傳檢測法 二、物理檢測法 三、核酸雜交篩選法 四、免疫化學檢測法 五、DNA?蛋白質篩選法 第六節基因工程研究...
第四節 重組子的篩選方法 (182)第九章 大腸桿菌表達系統 (186)第一節 基因表達系統概述 (186)第二節 大腸桿菌表達系統的主要表達元件 (188)第三節 常見的大腸桿菌表達系統 (191)第四節 外源基因在大腸桿菌中表達的主要影響因素 (194)第十章 酵母表達系統 (207)第一節 酵母表達系統的發展 (207...
第四節 重組子的篩選與鑑定 一、插入片段長度鑑定 二、插入片段方向性鑑定 小結 第六章 重組體在宿主細胞中表達與調控 第一節 基因表達概述 一、基因表達的概念 二、基因表達的基本條件 第二節 重組體在原核細胞中的表達 一、原核生物基因表達的特點 二、外源基因在原核細胞中表達的重要調控元件 三、原核細胞...
(4)引入寄主細胞:常用兩種方法:①轉化或轉染,方法是將重組質粒DNA或噬菌體DNA(M13)與氯化鈣處理過的宿主細胞混合置於冰上,待DNA被吸收後鋪在平板培養基上,再根據實驗設計使用選擇性培養基篩選重組子,通常重組分子的轉化效率比非重組DNA低,原因是連線效率不高,有許多DNA分子無轉化能力,而且重組後的DNA分子比...
原理部分以基因操作流程為主線,系統介紹基因工程的基本原理與技術基礎,包括基因工程的酶學基礎和載體、目的基因的獲取、基因的體外重組和轉移、重組子的篩選和鑑定、克隆基因的表達、外源基因表達產物的分離純化等,並儘可能反映基因工程領域的最新成果和技術。各論套用部分突出基因工程的套用性,通過選取大腸桿菌、酵母、...
五、重組子的篩選3 六、基因表達4 七、生物工程技術的套用5 參考文獻6 第二章核酸提取技術7 第一節質粒DNA的提取7 一、引言7 二、鹼裂解法小量質粒提取所需的儀器、材料及基本步驟8 三、Promega質粒DNA小量提取試劑盒操作程式9 四、注意事項10 五、實驗結果說明10 六、疑難解析10 第二節基因組DNA的提取12 ...
第五節重組子的篩選與鑑定 第六節克隆基因的表達 第七節重組DNA技術套用 第十章遺傳物質的複製 第一節複製概述 第二節DNA複製的相關蛋白質 第三節原核生物DNA複製的起始延伸和終止 第四節真核生物的複製過程 第五節DNA複製的調控 第六節逆轉錄 第七節RNA複製 第十一章DNA損傷修復和基因突變 第一節避免差錯...
第四節 重組子的篩選方法 (182)第九章 大腸桿菌表達系統 (186)第一節 基因表達系統概述 (186)第二節 大腸桿菌表達系統的主要表達元件 (188)第三節 常見的大腸桿菌表達系統 (191)第四節 外源基因在大腸桿菌中表達的主要影響因素 (194)第十章 酵母表達系統 (207)第一節 酵母表達系統的發展 (207...
項目七重組載體轉化大腸桿菌 【學習目標】103 【項目簡介】103 【項目引導】104 一、感受態細胞104 二、轉化方法104 三、重組子的篩選策略105 【項目實施】106 任務一E.coli感受態細胞的製備107 任務二熱激法轉化E.coli107 任務三轉化子的篩選——菌落PCR107 任務四轉化子的鑑定——酶切驗證108 任務五轉化子的...
實驗五 大腸埃希菌感受態細胞製備、轉化和重組子的篩選 實驗六 目的基因在大腸埃希菌中的表達及鑑定 第二章 基因工程製藥下游實驗 實驗一 發酵液的預處理和固液分離 實驗二 免疫球蛋白粗品的製備及含量測定 實驗三 離子交換柱色譜法分離混合胺基酸 實驗四 凝膠過濾色譜純化溶菌酶 實驗五 膜分離實驗 實驗六SDS一...
常用兩種方法:①轉化或轉染,方法是將重組質粒DNA或噬菌體DNA(M13)與氯化鈣處理過的宿主細胞混合置於冰上,待DNA被吸收後鋪在平板培養基上,再根據實驗設計使用選擇性培養基篩選重組子,通常重組分子的轉化效率比非重組DNA低,原因是連線效率不高,有許多DNA分子無轉化能力,而且重組後的DNA分子比原載體DNA分子大,...
6.6.6重組子的篩選165 6.6.7基因組文庫的構建167 6.6.8cDNA文庫的構建168 6.7克隆基因的表達168 6.7.1檢測表達產物的方法169 6.7.2外源基因在原核細胞中的表達170 6.7.3外源基因在真核細胞中的表達172 6.8轉基因植物和轉基因動物175 6.8.1轉基因植物175 6.8.2轉基因動物177 提要178 思考題180...