現代分子生物學技術與實驗技巧

《現代分子生物學技術與實驗技巧》是2015年化學工業出版社出版的圖書，作者是葉棋濃。

基本介紹

• 中文名：現代分子生物學技術與實驗技巧
• 出版時間：2015年
• 出版社：化學工業出版社

基本信息

作者：葉棋濃 主編

出版日期：2015年10月

書號：978-7-122-24502-1

開本：16K　787×1092　1/16

裝幀：精

版次：1版1次

頁數：480頁

內容簡介

現代分子生物學技術與實驗技巧系統介紹了現代分子生物實驗技術。第1~6章包括質粒的提取和目的基因的獲得、基因的克隆和重要分子的篩選以及目的基因的表達和檢測；第7~14章涉及近年來發展起來的一些新技術，包括報告基因分析、差異基因表達譜分析、蛋白質-核酸相互作用技術、蛋白質-蛋白質相互作用技術、細菌體內同源重組技術、轉基因動物、基因打靶技術和流式細胞術；第15~17章介紹了一些最新的分子生物學研究技術，包括幹細胞的分離培養與誘導分化技術、小RNA的構建及實驗技術、非編碼RNA資料庫及線上分析工具。

本書強調對實驗結果作具體分析，每個實驗結果都附圖或照片，圖中設陰陽性對照，對照圖對實驗結果進行詳細分析，使讀者對實驗結果一目了然，本書還指出了每個技術的難點和解決的辦法。

本書是生物、醫學及相關實驗室必備的工具書，適合於從事生命科學研究和教育的科技工作者和教師，更適合於從事生命科學研究的碩士和博士研究生參考閱讀。

目錄結構

第一章分子生物學技術概述1

一、引言1

二、目的基因的獲取1

三、克隆載體的構建和選擇2

四、載體的轉化2

五、重組子的篩選3

六、基因表達4

七、生物工程技術的套用5

參考文獻6

第二章核酸提取技術7

第一節質粒DNA的提取7

一、引言7

二、鹼裂解法小量質粒提取所需的儀器、材料及基本步驟8

三、Promega質粒DNA小量提取試劑盒操作程式9

四、注意事項10

五、實驗結果說明10

六、疑難解析10

第二節基因組DNA的提取12

一、引言12

二、從植物組織提取基因組DNA13

三、從動物組織提取基因組DNA14

四、細菌基因組DNA的製備15

五、用DNA提取試劑盒從全血和組織中提取基因組DNA15

六、注意事項17

七、實驗結果說明18

八、疑難解析18

第三節RNA的提取19

一、引言19

二、實驗設計思路和基本步驟20

三、實驗結果說明24

四、疑難解析24

參考文獻25

第三章目的基因的獲取及鑑定技術27

第一節普通PCR27

一、普通PCR的基本概念和原理27

二、普通PCR技術的實驗方法28

三、疑難解析33

第二節實時螢光定量PCR34

一、實時螢光定量PCR的基本概念和原理34

二、實時螢光定量PCR的定量方法38

三、螢光定量PCR的實驗方法43

四、螢光定量PCR技術的套用48

五、疑難解析54

第三節環介導恆溫擴增法快速檢測病原菌57

一、引言57

二、環介導恆溫核酸擴增的原理58

三、實驗設計思路和基本步驟60

四、實驗結果68

五、疑難解析69

六、小結72

參考文獻74

第四章載體的構建和鑑定78

第一節克隆載體78

一、pBR322載體78

二、pUC8——一種Lac選擇型質粒80

三、pGEM3Z——克隆DNA的體外轉錄80

四、柯斯質粒載體81

第二節表達載體82

一、原核表達載體82

二、真核表達載體84

第三節載體構建中的關鍵工具和步驟90

一、關鍵工具90

二、關鍵步驟91

第四節載體構建的套用舉例93

一、實驗材料93

二、實驗方法94

參考文獻98

第五章細菌轉化與細胞轉染技術100

第一節細菌轉化100

一、基本原理100

二、實驗設計思路和基本步驟101

三、實驗結果及分析102

四、疑難解析102

第二節細胞轉染104

一、基本原理104

二、實驗設計和基本步驟107

三、實驗結果及分析108

四、疑難解析109

參考文獻110

第六章外源基因表達的鑑定112

第一節Northern Blot112

一、引言112

二、實驗設計思路和基本步驟112

三、實驗結果說明115

四、疑難解析116

第二節RTPCR116

一、引言116

二、實驗設計思路和基本步驟117

三、實驗結果說明119

四、疑難解析119

第三節Western Blot120

一、引言120

二、實驗設計思路和基本步驟120

三、實驗結果說明125

四、疑難解析125

第四節ELISA126

一、引言126

二、實驗設計思路和基本步驟128

三、實驗結果說明130

四、疑難解析131

參考文獻132

第七章報告基因分析134

第一節報告基因的定義和種類134

一、報告基因的定義134

二、常用的報告基因134

第二節套用報告基因分析基因的轉錄活性135

一、實驗原理135

二、實驗設計和基本步驟136

三、實驗結果分析137

四、疑難解析139

第三節報告基因在動物活體成像中的套用140

一、實驗原理140

二、實驗設計和基本步驟142

三、實驗結果分析143

四、疑難解析144

參考文獻145

第八章差異基因表達譜分析147

第一節基於雙向電泳技術的蛋白質組學分析147

一、引言147

二、實驗基本步驟和注意事項147

三、雙向電泳實驗結果說明及疑難解析154

四、質譜數據分析說明及疑難解析154

五、結語160

第二節基因晶片160

一、引言160

二、工作原理161

第三節基因晶片的製備163

一、概述163

二、探針的選擇和製備164

三、基因晶片基片的選擇和準備165

四、基因晶片的製作166

第四節基因晶片的檢測168

一、基因晶片的雜交和數據獲取168

二、基因晶片分析常用的軟體和資料庫170

第五節基因晶片的套用171

一、基因晶片與病原微生物檢測171

二、基因晶片與腫瘤172

三、基因晶片與藥物研發174

四、結束語176

參考文獻177

第九章蛋白質核酸相互作用技術178

第一節凝膠遷移實驗178

一、引言178

二、實驗設計與基本步驟179

三、實驗舉例與結果說明184

四、需要注意的問題186

第二節染色質免疫共沉澱技術187

一、引言187

二、實驗基本步驟188

三、實驗舉例190

四、實驗注意事項191

第三節RNA沉降192

一、實驗基本原理192

二、實驗基本思路193

三、實驗舉例說明198

參考文獻199

第十章蛋白質-蛋白質相互作用技術200

第一節運用酵母雙雜交技術篩選與靶蛋白相互作用的蛋白質200

一、引言200

二、實驗設備及材料201

三、實驗設計流程202

四、實驗方法202

五、實驗結果說明208

六、疑難解析212

第二節GST沉降213

一、實驗基本原理213

二、實驗基本步驟213

三、實驗舉例216

四、實驗注意事項220

第三節免疫共沉澱221

一、引言221

二、實驗設計和基本步驟222

三、實驗結果舉例223

四、需要注意的問題226

第四節細胞共定位226

一、引言226

二、實驗設計和基本步驟227

三、實驗結果舉例說明227

四、實驗注意事項229

參考文獻229

第十一章微生物體內同源重組技術231

第一節傳統的大腸桿菌體內同源重組方法（RecA重組系統）231

一、引言231

二、利用RecA重組系統構建痢疾桿菌hns基因插入突變體231

三、RecA重組系統構建突變體的其他方法234

四、存在的問題和解決方法235

五、小結235

第二節Red/ET重組系統236

一、引言236

二、痢疾桿菌酸hns基因缺失突變體的構建237

三、Red同源重組技術套用策略239

四、套用Gap-Repair克隆技術構建pBR322-Red載體241

五、Red/ET重組系統的其他套用244

六、小結244

參考文獻244

第十二章轉基因動物技術246

第一節轉基因動物概述246

一、轉基因動物的概念246

二、轉基因動物的分類246

三、轉基因動物的命名247

四、轉基因動物的基本原理248

五、轉基因動物的安全性和倫理學問題249

六、轉基因動物技術的發展概況250

第二節顯微注射法製備轉基因動物251

一、儀器設備及材料251

二、實驗動物準備252

三、轉基因動物製備方法253

四、影響轉基因動物效率的因素256

第三節利用ES細胞製備轉基因動物257

一、ES細胞的研究歷史257

二、ES細胞的生物學特性257

三、ES細胞分離培養的基本方法258

四、ES細胞的遺傳修飾262

五、轉基因製備269

參考文獻270

第十三章基因打靶技術271

一、基因打靶技術的原理271

二、利用同源重組構建基因打靶動物模型的基本步驟272

三、基因打靶的策略274

四、基因打靶的生物學意義和套用前景286

參考文獻287

第十四章流式細胞術實驗方法291

一、引言291

二、實驗方法294

三、實驗結果分析299

四、流式細胞分析的質量控制309

參考文獻311

第十五章幹細胞的分離培養與誘導分化313

第一節人胎盤來源間充質幹細胞的分離培養與純化313

一、引言313

二、材料、試劑與主要儀器設備314

三、實驗方法315

四、實驗結果318

五、注意事項321

第二節小鼠間充質幹細胞的分離培養與純化324

一、引言324

二、骨髓法325

三、密質骨法325

第三節人胚胎幹細胞的培養334

一、引言334

二、實驗材料335

三、實驗方法335

四、注意事項339

第四節CD34+造血幹細胞與CD14+單核細胞向樹突狀細胞的誘導分化339

一、引言339

二、實驗材料與方法340

三、實驗結果343

四、注意事項345

參考文獻346

第十六章小RNA的構造及實驗技術351

第一節miRNA克隆351

一、材料與設備352

二、實驗方法352

三、疑難解析355

第二節miRNA Northern Blot355

一、材料與設備355

二、實驗方法356

三、疑難解析357

第三節miRNA原位雜交357

一、材料與設備357

二、實驗方法358

三、疑難解析359

第四節基於poly(A)加尾的miRNA RT-PCR359

一、材料與設備359

二、實驗方法360

三、疑難解析361

第五節miRNA功能研究362

一、miRNA表達檢測362

二、miRNA功能篩選鑑定362

三、miRNA靶基因鑑定364

第六節siRNA的構造及實驗研究365

一、引言365

二、如何進行siRNA實驗368

三、常用siRNA實驗的基本步驟371

四、實驗結果說明374

五、疑難解析376

參考文獻376

第十七章非編碼RNA資料庫及線上分析工具介紹379

一、綜合性非編碼RNA資料庫379

二、miRNA相關資料庫及預測403

三、rRNA相關資料庫及預測424

四、sRNA相關資料庫及預測432

五、siRNA相關資料庫及預測448

六、tRNA相關資料庫及預測456

七、snoRNA相關資料庫及預測471