基本介紹
- 中文名：血清滅活
- 選用：與血清瓶同規格的對照瓶一個
- 對照：瓶內放入與血清等體積的水
- 步驟：①~⑥
血清熱滅活操作步驟,對血清熱滅活的新爭議,成為常規操作的血清熱滅活,熱敏補體與熱滅活,支原體與熱滅活,胚胎髮育與熱滅活,細胞株生長與熱滅活,沉澱與熱滅活,結論,
血清熱滅活操作步驟
①選用與血清瓶同規格的對照瓶一個。
②對照瓶內放入與血清等體積的水。
③溫度預試。
對照瓶內插入2—3支經挑選的溫度計(保證測試溫度的準確性)，放入水浴箱中，接通電源，調節溫度控制鈕，使水浴箱溫度所示溫度保持在56℃。
④血清滅活。
血清瓶與帶溫度計的對照瓶一齊放入水浴箱中，待溫度計所示溫度上升至56℃時， 定時30分鐘。
⑤大瓶血清滅活後，進行分裝。
⑥保存。
分裝後，抽樣做無菌試驗，－20～－70℃保存。
對血清熱滅活的新爭議
成為常規操作的血清熱滅活
至少70%的研究者對血清的滅活僅僅是因為遵照常規操作，或者說認為是理所當然的。常規滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等，其中最常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清採集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。
熱敏補體與熱滅活
熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質，但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。Triglia和Linscott曾對商業胎牛血清中的補體成分進行測定，他們發現胎牛血清中含有的C1，C6僅達成年動物血清的1-3%，而其它補體成分僅有成年動物的5-50%，至於補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補體固定實驗，我們也在多個不同批次的胎牛血清中獲得了相似的結果。即使是在未稀釋的血清中，也未發現有明顯的溶血現象。
另外，多數實驗室在培養前將培養液進行預熱的過程，也對熱敏的補體有滅活的作用。
支原體與熱滅活
在對補體滅活以外，熱處理同時也對血清中可能存在的支原體具有滅活作用。多年以前，450納米孔徑的濾膜被用於加工血清時，血清中支原體的污染時有發生。針對這個問題，HyClone首家使用100納米三層濾膜連續濾過技術，自從採用這項技術以及後來的40納米濾過技術之後，我們的血清產品中沒有再發現有支原體的污染，也是使得熱滅活成為不必要的另外一個原因。
胚胎髮育與熱滅活
Pinyopummintr等證明血清去除滅活步驟不影響牛胚胎的發育分化；有研究結果證實熱滅活步驟減弱了胎牛血清和小牛血清對細胞的促粘附作用，在用SV-BHK、BALB-3T3、CV－1、FS-4細胞對細胞粘附實驗中，熱滅活對胎牛血清的影響小於對小牛血清的影響。
細胞株生長與熱滅活
沉澱與熱滅活
在正常操作下，熱滅活經常給血清產品帶來負面的影響，對血清的加熱經常導致血清中沉澱的產生，而導致的沉澱又常常被認為是微生物的污染。注意到這個現象之後，為了驗證污染的存在，或者促進沉澱的溶解，許多培養者往往將血清放置37℃溫育。這卻往往使情況變得更糟，血清中的蛋白進一步的析出，為了確信血清未被污染，進行的鏡檢，無菌培養試驗，和革蘭氏染色試驗更是浪費了實驗者大量的時間和精力。
